عزل الخلايا قليلة التغصن الأولية في الفئران باستخدام الخرز المناعي المغناطيسي

خذ تعليق الخلايا العصبية ، بما في ذلك الخلايا قليلة التغصن غير الناضجة والخلايا العصبية الأولية ، من جرو فأر.

أعد تعليق الخلايا في مخزن مؤقت لفرز الخلايا المغناطيسية لتجنب تكتل الخلايا.

أضف الميكروبيدات المغناطيسية المصممة هندسيا التي تحمل أجساما مضادة ل O4 على سطحها. حرك المحلول لضمان خلط موحد.

احتضان لتمكين الميكروبيدات من الارتباط بالجالاكتوليبيد الكبريتي ، وهو مستضد O4 على الخلايا قليلة التغصن ، بينما تظل الخلايا الأخرى غير مرتبطة أو مرتبطة بشكل فضفاض.

اغسل المزيج بمخزن إضافي لفرز الخلايا.

جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية ، ثم قم بتعليق الخلايا.

بعد ذلك ، قم بتمرير الخلايا المرتبطة بالخرزة إلى عمود فصل مغناطيسي مزود بمرشح يزيل كتل الخلايا الأكبر.

أثناء الجري ، تحت مجال مغناطيسي ، تتحرك المجمعات المرتبطة بالخرز نحو المغناطيس ، وترتبط على الجانبين.

يغسل لإزالة الخلايا غير المربوطة وغير المربوطة.

استرجع العمود من الفاصل واغسله بوسيط تكاثر لجمع الخلايا الدبقية قليلة التغصن الأولية للتطبيقات المستقبلية.

بعد العد ، قم بالطرد المركزي للخلايا مرة أخرى ، وأعد تعليق الحبيبات في 90 ميكرولترا من المخزن المؤقت لفرز الخلايا المغناطيسية الطازجة لكل 1 × 10⁷ خلايا. بعد ذلك ، أضف 10 ميكرولترات من الخرز المضاد ل O4 لكل 1 × 10⁷ خلايا ، واخلط محلول الخلية بنقرة لطيفة. بعد 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية ، بنقرة لطيفة ، كل 5 دقائق ، أضف برفق 2 مل من المخزن المؤقت لفرز الخلايا المغناطيسية لكل 1 × 10⁷ خلايا للغسيل بالطرد المركزي ، وتخلص من المادة الطافية عن طريق الشفط بالتفريغ الدقيق.

أعد تعليق الحبيبات في 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت لفرز الخلايا المغناطيسية الطازجة لكل 1 × 10⁷ خلايا وضع عمود فرز حبة مغناطيسية بحجم مناسب في الفاصل المغناطيسي المقابل له. ضع مصفاة 40 ميكرون على العمود واشطف المصفاة مسبقا ب 3 ملليلتر من المخزن المؤقت لفرز الخلايا المغناطيسية ، مما يسمح للمخزن المؤقت بالتمرير عبر العمود دون ترك العمود يجف. أضف الخلايا إلى المصفاة ، متبوعا بغسل 1 مليلتر باستخدام مخزن مؤقت لفرز الخلايا المغناطيسي.

اغسل العمود ثلاث مرات باستخدام 3 ملليلتر من المخزن المؤقت لفرز الخلايا المغناطيسي لكل غسلة ، ومرة واحدة باستخدام وسط تكاثر الخلايا قليلة التغصن. بعد ذلك ، انقل العمود إلى أنبوب سعة 15 مليلتر واستخدم المكبس لطرد 5 ملليلتر من وسط تكاثر الخلايا قليلة التغصن الطازجة على الفور عبر العمود.