إنشاء نموذج لزراعة الأعضاء المؤيدة للالتهابات لمحاكاة مرض القرص الفقري المبكر

خذ ذيل بقري.

قم بإزالة الأنسجة العلوية والعمليات الفقرية ، ثم قم بقصها بشكل عرضي للحصول على شرائح.

حدد القرص الفقري أو IVD الموجود بين صفائح النمو وألواح نهاية العمود الفقري.

اقطع على جانبي جهاز الحقيقة والحقيقة والحقيقة وضعه في طبق يحتوي على شاش مبلل بالمخزن المؤقت للحفاظ على صلاحية الأنسجة.

اكشط أي أنسجة فقرية متصلة وقم بقياس ارتفاع IVD.

يغسل بمحلول عازل لإزالة بقايا الدم وتطهير IVD في مخزن يحتوي على مضادات حيوية.

ضع أجهزة IVD في غرف المفاعل الحيوي التي تحتوي على أوضاع.

تحتوي الوسائط في المجموعة الفسيولوجية على نسبة عالية من الجلوكوز ، بينما في المجموعة المرضية ، يؤدي الوسط منخفض الجلوكوز إلى الحرمان من المغذيات.

ضع الغرف في المفاعل الحيوي.

بالنسبة لجهاز IVD الفسيولوجي ، ضع حمولة لطيفة يوميا. بالنسبة لمرض IVD المرضي ، ضع حمولة مكثفة بمعدل أعلى يوميا.

بين اختبارات التحميل اليومية ، اسمح لأجهزة IVD بالتعافي في الوسائط.

بعد جميع إجراءات التحميل ، قم بقياس ارتفاعات IVD.

يشير انخفاض الارتفاع في أجهزة IVD المرضية إلى حالة تنكسية ومؤيدة للالتهابات.

ابدأ بشطف ذيل البقر بالكامل بماء الصنبور لإزالة الأوساخ والشعر على السطح. ثم اغمر الذيل في محلول بيتادين 1٪ لمدة 10 دقائق لتطهير السطح. استخدم مشرط رقم 20 لإزالة الأنسجة الرخوة من العمود الفقري الذيلية لتسهيل التعرف على الأقراص الفقرية أو IVDs.

قم بإزالة العمليات الشائكة والعرضية للفقرات باستخدام زردية إزالة العظام. قم بقص بشكل عرضي باستخدام كماشة عظمية من خلال منتصف كل جسم فقري للحصول على مقاطع حركة فردية ، ثم ضع مقاطع الحركة المجمعة في طبق بتري مع شاش مبلل في محلول رينجر.

حدد موقع IVD والفقرات عن طريق تحريك مقاطع الحركة برفق. بعد ذلك ، حدد موقع صفيحة النمو عن طريق لمس وإيجاد الجانب المحدب من الصفيحة النهائية العظمية. قم بتبريد شفرة المنشار الحزامي بمحلول Ringer ، واستخدمه لعمل قطعتين متوازيتين في صفيحة نمو IVDs ، واحدة على كل جانب.

انقل IVDs إلى طبق بتري نظيف بشاش نظيف مبلل بمحلول رينجر. اكشط الجسم الفقري وصفيحة النمو باستخدام شفرة المشرط ، واترك الصفيحة النهائية سليمة. ضع السطحين بشكل مسطح ومتوازي لإجراء التحميل ، وانقل أجهزة IVD المكشطة إلى طبق بتري طازج مع شاش مبلل بمحلول Ringer.

قم بقياس ارتفاع القرص وقطره باستخدام الفرجار. بعد ذلك ، قم بتنظيف الجلطات الدموية في عظم الفقرات بمحلول Ringer باستخدام نظام الغسيل النفاث. تطهير IVDs في PBS و 10٪ بنسلين ستربتومايسين ، مع رج لمدة 15 دقيقة. اشطف المضادات الحيوية عالية التركيز باستخدام PBS و 1٪ بنسلين ستربتومايسين.

نقل الأقراص إلى غرف IVD التي تحتوي على 5 ملليلتر من وسط استزراع IVD ، ووضعها في نظام المفاعل الحيوي مع حاضنة عند 37 درجة مئوية مع رطوبة 85٪ وثاني أكسيد الكربون 5٪. استزراع الأقراص لمدة أربعة أيام داخل نظام المفاعل الحيوي من خلال الحفاظ على ظروف تحميل مختلفة وفقا للمجموعات التجريبية.

في مجموعة المراقبة الفسيولوجية ، يتم زراعة IVDs بوسط جلوكوز مرتفع باستخدام بروتوكول تحميل من 0.02 إلى 0.2 ميجا باسكال و 0.2 هرتز لمدة ساعتين في اليوم. في المجموعة المرضية ، استزراع IVDs بوسط منخفض الجلوكوز باستخدام بروتوكول تحميل من 0.32 إلى 0.5 ميجا باسكال و 5 هرتز لمدة ساعتين في اليوم.

بين إجراءات التحميل ، ضع أجهزة IVD في ألواح من ستة آبار مع 7 ملليلتر من وسط ثقافة IVD لاستعادة التورم مجانا. قم بقياس ارتفاع القرص يوميا باستخدام الفرجار بعد فترة التورم الحر وبعد التحميل الديناميكي للمدة التجريبية.