موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:19 دقيقة • July 8th, 2025
خذ معلقا للخلايا والحطام من الألياف العصبية الوركي للفأر المهضومة إنزيميا.
تمر عبر مصفاة ، وإزالة الحطام.
الطرد المركزي المرشح وإزالة المادة الطافية.
أعد تعليق الخلايا في وسائط تحتوي على مصل وزرعها في صفيحة ثقافة مغلفة بالبروتين الالتصاق.
احتضان التصاق الخلايا. استبدل الوسائط بوسائط Schwann الخلوية. احتضان لتكوين خلية شوان أحادية الطبقة.
قم بإزالة الوسائط وغسلها بمخزن مؤقت. احتضان مع التربسين لفصل الخلايا.
أضف وسائط تحتوي على مصل لإيقاف النشاط الأنزيمي.
اجمع الخلايا وأجهزة الطرد المركزي. تخلص من المادة الطافية.
أعد تعليق الخلايا في العازلة وأضف الميكروبيدات المغناطيسية المطلية بالأجسام المضادة.
احتضان لربط الأجسام المضادة بالبروتينات السكرية للأرومات الليفية.
جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في المخزن المؤقت ، وقم بتحميلها في عمود فصل مغناطيسي يحتوي على كرات مغناطيسية موضوعة في المجال المغناطيسي للفاصل المغناطيسي.
يحتفظ المجال المغناطيسي بالخلايا الليفية المرتبطة بالميكروبيدات ، مما يسمح بجمع خلايا شوان في التدفق.
انقل الأعصاب المهضومة إلى أنبوب سعة 50 مليلتر إلى جهاز طرد مركزي عند 188 جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات في 10 ملليلتر من DMEM تحتوي على 10٪ FCS و 50 ميكروغرام لكل مليلتر من الجنتاميسين.
بعد ذلك ، قم بتصفية تعليق الخلية من خلال مصفاة خلية 100 ميكرومتر. بعد الطرد المركزي عند 188 جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية ، أعد تعليق الحبيبات ب 4 ملليلتر من DMEM يحتوي على FCS والجنتاميسين. أضف 2 مل من تعليق الخلية إلى كل من أطباق ثقافة الأنسجة المغلفة ب 60 ملليمتر من بولي إل ليسين واللامينين. احتضان عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون ، مع ترك الصفائح كما هي لمدة يومين في الحاضنة.
جهاز الطرد المركزي لتعليق خلية شوان عند 188 جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية ، وأعد تعليق حبيبات الخلية في 90 ميكرولتر من المخزن المؤقت لفصل الخلايا المغناطيسية لكل 1 × 107 خلايا. ثم أضف 10 ميكرولترات من ميكروبيدات Thy-1 لكل 1 × 107 خلايا. احتضان المحلول المعلق لمدة 15 دقيقة في الظلام عند 8 درجات مئوية.
بعد ذلك ، أضف 2 مل من المخزن المؤقت لفصل الخلايا المغناطيسية إلى تعليق الخلية. بعد الطرد المركزي عند 300 جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية ، أعد تعليق الحبيبات في 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت لفصل الخلايا المغناطيسية. ضع عمود فصل الخلية المغناطيسية في فاصل الخلية ، وبلل العمود ب 1 مليلتر من المخزن المؤقت لفصل الخلية المغناطيسية. ثم قم بتطبيق الخلايا عليها لجمع التدفق من خلال.