توليد شرائح اللوزة المائلة من دماغ الفأر

خذ دماغ فأر مغمورا في مخزن مؤقت مثلج.

قم بإزالة المخيخ وتقليم الجزء الأمامي الذي يحتوي على قشرة الفص الجبهي الإنسي ، أو mPFC.

قم بتوصيل الأنسجة بكتلة أجار بزاوية ، والتي يتم لصقها على مرحلة عينة الاهتزاز.

قم بتوصيل كتل أجار إضافية لتوفير الثبات أثناء التقطيع. ضع المسرح داخل حجرة القطع الاهتزازية المملوءة بمحلول مثلج بارد مؤكسج.

قم بإنشاء شرائح مائلة تحتوي على اللوزة التي تستجيب لمنبهات الخوف والإسقاطات العصبية من mPFC ، والتي تشكل روابط متشابكة في اللوزة وتنظم نشاطها.

تكشف الشرائح المائلة عن الإسقاطات ، مما يسمح بدراسة الاتصال الوظيفي بين mPFC واللوزة.

نقطع الشرائح إلى نصفين ونضعها في حجرة تحتوي على سائل نخاعي صناعي مؤكسج في درجة حرارة الغرفة لتثبيت الأنسجة.

احتضان الشرائح في درجة الحرارة الفسيولوجية لاستعادة الأنسجة لإجراء فحوصات المصب.

استخدم مشرطا لقطع المخيخ. بعد ذلك ، اعزل الجزء الأمامي من الدماغ الذي يحتوي على قشرة الفص الجبهي الإنسي. املأ حجرة القطع بمحلول القطع المثلج البارد الذي يتم الحفاظ عليه عند 4 درجات مئوية باستخدام وحدة التبريد. أكسجة المحلول.

جفف الدماغ بورق الترشيح. قم بلصق كتلة أجار بنسبة 4٪ التي تم قطعها بزاوية 35 درجة على المرحلة الاهتزازية ، وقم بلصق الجزء الخلفي من أنسجة المخ على هذه الكتلة. قم بلصق كتلتين إضافيتين من الأجار أمام وخلف كتلة الدماغ لتحقيق الاستقرار أثناء التقطيع.

ضع المرحلة مع الأنسجة المرفقة في غرفة التقطيع ، وتأكد من غمرها. ابدأ في تقطيع الشرائح الحادة. اقطع كل شريحة إلى نصفين ، وانقلها إلى غرفة واجهة مزودة ب ACSF المؤكسج في درجة حرارة الغرفة. بعد تقطيع شرائح اللوزة الحادة ، ضع حجرة الواجهة في حمام مائي على حرارة 36 درجة مئوية ، واترك الشرائح تتعافى لمدة 35 إلى 45 دقيقة.