موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:26 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بدماغ فأر حديثي الولادة وانقله إلى أنبوب يحتوي على محلول إنزيم محلل للبروتين.
تعملالإنزيمات على تدهور المصفوفة خارج الخلية للأنسجة وتبدأ في تفكك الخلايا.
اغسل الأنسجة المهضومة بشكل متكرر بوسط نمو لإزالة الإنزيمات.
استخدم ماصة ذات قطر أكبر لتحريك الأنسجة بشكل متكرر عبر الماصة لفصلها إلى شظايا أصغر.
بعد ذلك ، باستخدام ماصة ذات قطر أصغر ، استمر في فصل الشظايا ، مما يؤدي إلى تعليق الخلية.
قم بتصفية هذا المعلق لإزالة كتل الخلايا والحصول على معلق أحادي الخلية يحتوي على خلايا عصبية أولية ومجموعة مختلطة من الخلايا الدبقية ، بما في ذلك الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا النجمية.
قم بزرع الخلايا في قارورة مزرعة تحتوي على وسط نمو واحتضانها لتعزيز التماسك.
بمرور الوقت ، يؤدي عدم وجود عوامل نمو الخلايا العصبية في الوسائط إلى موت الخلايا العصبية.
استبدل الوسائط المستهلكة بوسائط جديدة. تستخدم الخلايا الدبقية العناصر الغذائية وتتكاثر ، مما يولد ثقافة دبقية مختلطة من الخلايا النجمية والخلايا الدبقية الصغيرة.
انقل الدماغ إلى أنبوب سعة 50 مليلتر يحتوي على 2 مليلتر من 0.25٪ تريبسين EDTA ، واحتضانه لمدة 15 دقيقة في حمام مائي 37 درجة مئوية. اغسل الدماغ بوسط نمو طازج ، عن طريق إضافة الوسط وإزالته. بعد الانتهاء من الغسلات ، أضف 2 مل من وسط النمو لكل دماغ ، وقم بتجانس الدماغ.
عندما لا تصبح أنسجة المخ أصغر ، انتقل إلى ماصة ذات فتحة أصغر. في نهاية المعايرة عندما يكون التعليق واضحا بدون قطع مرئية، مرر المعلق عبر مصفاة خلية 70 ميكرون لإنشاء مزرعة أحادية الخلية.
بعد ذلك ، قم بتقطيع الماصة من 8 إلى 9 ملليمترات من وسط النمو إلى قوارير T75 ، وقارورتين لكل دماغ ، وأضف 1 مليلتر من تجانس الدماغ إلى كل قارورة. تنمو الخلايا حتى العزلة في اليوم السادس عشر.