تمييز الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان إلى خلايا شبيهة بالخلايا الدبقية الصغيرة

JoVE Encyclopedia of Experiments

علم الأعصاب

0 مشاهدات • 4:03 د • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بصفيحة متعددة الآبار منخفضة الالتصاق تحتوي على خلايا جذعية متعددة القدرات يسببها الإنسان في جسم جنيني أو وسط EB.

جهاز طرد مركزي لتسوية الخلايا. احتضان لتعزيز تكاثر الخلايا وتجميعها ، وتشكيل أجسام جنينية.

يعزز

منظمو سلالة الخلية تمايز الخلايا إلى أسلاف نخاعية.

اجمع هذه الارتفاعات الصوتية وانقلها إلى حافة مصفوفة خارج الخلية أو لوحة مطلية ب ECM.

استبدل الوسط بسلائف بدائية من البلاعم أو وسط تمايز PMP وقم بتحريكه برفق. احتضان لتسهيل ارتباط المصارف المؤسسية بإدارة المحتوى المؤسسي.

استبدل نصف الوسط واحتضن.

تدفع عوامل النمو المكونة للدم أسلاف النخاع إلى التمايز إلى سلائف البلاعم البدائية ، والتي تنفصل عن EBs وتظهر في الوسط.

اجمع هذه PMPs وقم بتدوير الخلايا. أعد تعليقها في وسط تمايز الخلايا الدبقية الصغيرة.

بذر هذه الخلايا في صفيحة متعددة الآبار مطلية بطبقة من اللامينين واحتضنها.

تستخدم PMPs عوامل التمايز والعناصر الغذائية ، وتتمايز إلى خلايا شبيهة بالخلايا الدبقية الصغيرة ، وهي نوع من الخلايا المناعية في الدماغ.

بالنسبة لخلايا الطلاء ، أضف 100 ميكرولتر من الخلايا المخففة لكل بئر إلى صفيحة مستديرة منخفضة الالتصاق ذات 96 بئر. قم بالطرد المركزي للوحة عند 125 مرة جم لمدة ثلاث دقائق ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة أربعة أيام.

في اليوم 2، باستخدام ماصة متعددة القنوات، استبدل وسط النصف EB القديم بوسط جديد. لتوليد سلائف البلاعم البدائية أو PMPs ، قم بتغطية آبار صفيحة 6 آبار بإضافة 1 مل من محلول طلاء ماتريجيل المثلج. ثم احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ساعتين أو طوال الليل.

في اليوم 4 من تمايز EB ، باستخدام طرف ماصة سعة 1 مليلتر ، قم بنقل EBs إلى الآبار المطلية بالماتريجل. الماصة صعودا وهبوطا لإخراج EBs من البئر. بعد ذلك ، أمسك اللوحة مائلة للسماح ل EBs بالاستقرار على حافة البئر.

بمجرد أن تستقر جميع EBs ، قم بعمل الماصة برفق واستبدال الوسط القديم مع الحفاظ على EBs على حافة البئر ب 3 ملليلتر من وسط PMP الكامل المحضر حديثا. قم بتوزيع الخلايا بالتساوي في الآبار عن طريق خلط الألواح يدويا جنبا إلى جنب ومن الخلف إلى الأمام. بعد ذلك ، احتضن اللوحة لمدة سبعة أيام للسماح ل EBs بالالتصاق بقاع البئر.

بعد سبعة أيام ، افحص EBs تحت مجهر مجال الضوء بتكبير 4 مرات للتأكد من أنها متصلة بقاع الآبار. قم بإجراء تغيير نصف متوسط ، وفي اليوم 21 ، استبدل الوسط الكامل ب 3 ملليلتر من PMP المتوسط الكامل.

في اليوم 28 ، ابحث عن الخلايا المستديرة التي يشار إليها باسم PMPs في المادة الطافية. بعد ذلك، اجمع الوسيط الذي يحتوي على PMPs باستخدام ماصة سعة 10 ملليلتر وماصة أوتوماتيكية دون إزعاج EBs.

انقل PMPs في الوسط إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلترا. الطرد المركزي PMPs التي تم جمعها عند 200 مرة جم لمدة أربع دقائق وشفط المادة الطافية قبل تعليقها في 1 إلى 2 مل من الخلايا الشبيهة بالخلايا الدبقية الصغيرة أو الوسط القاعدي IMG.

بعد ذلك ، عد الخلايا على مقياس الدم ، كما هو موضح سابقا. الطرد المركزي لبقية الخلايا وتخفيف PMPs إلى التركيز المطلوب. بعد ذلك ، قم بوضع الخلايا بكثافة 105 خلايا لكل سنتيمتر مربع على ألواح معالجة بزراعة الخلايا باستخدام وسيط IMG كامل معد حديثا.

08:05

إنتاج وتوصيف القالفات البشرية من الخلايا الجذعية المتعددة القدرات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:56

تمايز الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان إلى ضامة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:33

تمييز الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة من قبل الإنسان إلى خلايا عصبية على مصفوفات الأقطاب الكهربائية الدقيقة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

02:16

تمييز الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات غير المعدلة وراثيا إلى خلايا سلفية عصبية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:02

بروتوكول لتمييز الخلايا الجذعية المحفزة البشرية المستحثة في الثقافات المختلطة من الخلايا العصبية والجلد للاختبار العصبي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:32

تحليل نقل الميتوكوندريا ومورفولوجيا في الخلايا العصبية الجذعية المستحثة البشرية متعددة القدرات المشتقة من الخلايا الجذعية في الشلل النصفي التشنجي الوراثي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:09

تحليل التدفق الخلوي لمعلمات الميتوكوندريا المتعددة في الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة بالإنسان ومشتقاتها العصبية والدبقية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:35

زرع الخلايا الدبقية الصغيرة المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان في دماغ الفئران المناعية عبر طريق الأنف غير الغازي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:19

الخلايا الدبقية الصغيرة البشرية: التمايز عن الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات ومقايسة البلعمة في الخلايا الحية في المختبر باستخدام المشبك البشري

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:12

هندسة الخلايا الدبقية الصغيرة المستحثة بالدم البشري لأبحاث الدماغ العكسية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 15 أغسطس 2026