عزل مجموعات الخلايا عن أنسجة المخ باستخدام فرز النوى المنشط بالفلورة

انقل قطعة من أنسجة المخ البشري المجمدة الطازجة إلى مطحنة مناسبة تحتوي على عازلة للتحلل البارد.

حرك المدقة لأعلى ولأسفل لكسر الأنسجة ميكانيكيا ، وإطلاق الخلايا.

تكسر جزيئات المنظفات الموجودة في المخزن المؤقت للتحلل غشاء الخلية ، وتطلق النوى.

انقل المحتويات إلى أنبوب طرد مركزي مناسب وأضف عازلة السكروز الباردة إلى قاع الأنبوب ، مما يخلق تدرجا في الكثافة.

جهاز طرد مركزي بسرعة عالية لفصل النوى في قاع الأنبوب.

تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق النوى في محلول ملحي مخزن.

أضف الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروفور الخاصة بالهدف إلى النوى واحتضانها للسماح للجسم المضاد بالارتباط بالبروتين النووي المستهدف.

أضف صبغة تلطيخ نووية لتصور الحمض النووي السليم.

قم بإجراء فرز النوى التي يتم تنشيطها بالفلورة لفرز نوى مجموعات الخلايا المختلفة بناء على إشارات مضان مميزة.

ابدأ في تشريح ما يقرب من 200 إلى 400 ملليغرام من الأنسجة من عينة من أنسجة قشرة القشرة البشرية البالغة الطازجة والمجمدة. ضع الأنسجة في منديل زجاجي سعة 7 ملليلتر يحتوي على 4 ملليلتر من محلول التحلل المثلج البارد على الثلج ، وطحن الأنسجة حوالي 50 مرة.

انقل الجانس إلى أنبوب بولي بروبيلين فائق الطرد المركزي سعة 12 ملليلتر. استخدم ماصة سعة 5 ملليلتر لإضافة 6.5 مل من السكروز البارد إلى قاع أنبوب الطرد المركزي الفائق دون إزعاج الواجهة بين السكروز