JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:10 د • July 8th, 2025
خذ تعليقا للخلايا التي تم الحصول عليها من ديدان Caenorhabditis elegans المعدلة وراثيا في وسط استزراع.
يحتوي المعلق على خلايا من أنسجة مختلفة ، بما في ذلك الخلايا العصبية من الجهاز العصبي.
تم تصميم الديدان المعدلة وراثيا للتعبير عن بروتين فلوري مترافق مع ناقل غشاء حويصلي. تم العثور على هذا الناقل, الموجود على الحويصلات المشبكية التي تحمل الناقل العصبي أستيل كولين, في الخلايا العصبية اتروبين في جميع أنحاء الجسم.
الطرد المركزي تعليق الخلية والتخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في وسط مزرعة جديد لفرز الخلايا المنشطة بالفلورة ، أو FACS.
تحليل تعليق الخلية باستخدام FACS. تنبعث الخلايا العصبية الكولينية المصنفة بالفلورسنت من التألق عند التعرض لضوء بطول موجي مناسب ، مما يفصلها عن الخلايا الأخرى غير المسماة.
انقل الخلايا العصبية المعزولة إلى صفيحة متعددة الآبار. احتضان الخلايا في غرفة رطبة للحفاظ على مستوى الرطوبة.
خلايا الطرد المركزي من معلق الخلية المعزولة عند 10,000 مرة جم وعند 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا المحببة في وسط مكمل L-15 إلى كثافة خلية لا تزيد عن 6 ملايين خلية لكل مليلتر لتجنب التحميل الزائد على مقياس التدفق الخلوي. بعد ذلك ، قم بفرز الخلايا حسب التعبير الإيجابي ل GFP باستخدام مقياس التدفق الخلوي القادر على فرز العينات.
يمكن استخدام الخلايا السالبة GFP كعنصر تحكم في التحليل غير الخاص بنوع الخلية. بعد ذلك ، ضع الخلايا المعزولة في آبار صفيحة معقمة مكونة من ستة آبار. ضع الطبق في وعاء بلاستيكي. أضف منديلا مبللا أو مناديل ورقية ناعمة لإضافة الرطوبة إلى الخلايا واحتضانها عند 20 درجة مئوية.