الحصول على شرائح المخيخ من دماغ كتكوت جنيني

خذ بيضة دجاجة مخصبة في مرحلة مناسبة من التطور.

قطع القشرة للوصول إلى الجنين.

حدد موقع الرأس وقم بتشريحه ، ثم انقله إلى طبق بتري يحتوي على عازلة فوسفات مبردة.

قم بإزالة العينين والفكين.

افصل الجلد عن سطح الجمجمة.

بعد ذلك ، قم بقص وإزالة عظام الجمجمة.

قم بتنظيف النسيج الضام المحيط لكشف الدماغ.

افصل الدماغ الأمامي.

ثم افصل المخيخ عن الدماغ الخلفي والأوعية الدموية.

انقل المخيخ إلى مخزن مؤقت للملح المبرد.

يحتوي المخيخ الجنيني على طبقة من الخلايا السلفية العصبية سريعة الانقسام ، مما يجعله ذا قيمة لدراسات تكوين الخلايا العصبية.

ضع المخيخ على منصة مفرمة الأنسجة.

قم بإزالة المخزن المؤقت الزائد وقطع المخيخ.

ضع عازلة الملح المبرد على الشرائح.

انقل شرائح المخيخ إلى طبق بتري يحتوي على محلول ملح مبرد.

تحت المجهر ، افصل الشرائح الفردية لمزيد من التحليل.

للبدء ، ضع بيض الدجاج البني المخصب في حاضنة البيض عند 38 درجة مئوية حتى يصل إلى اليوم الجنيني 14. في اليوم الجنيني 14 ، قم بقطع فتحة في البويضة لكشف الجنين ، وقطع رأس جنين الفرخ في البيض. ضع الرأس في طبق بتري يحتوي على PBS مثلج.

تحت المجهر التشريحي ، استخدم ملقطا قياسيا لعمل شق خلف كل عين ، على طول الطريق عبر الأنسجة ، وإزالة العينين والفك العلوي. بعد ذلك ، قم بعمل شق ثان على طول الطريق عبر البلعوم لإزالة الفك السفلي. بعد ذلك ، استخدم ملقطا قياسيا لإزالة الجلد من سطح الجمجمة عن طريق تقشيره. ثم قم بإزالة العظام الأمامية والجدارية ، وكشف الدماغ.

من الجانب البطني ، قم بإزالة الغضروف البلعومي واللحمة المتوسطة المساعدة. بعد ذلك ، ضع الدماغ ، الجانب الظهري لأعلى وقم بإزالة اللحمة المتوسطة بعناية ، الظهرية إلى الدماغ الخلفي ، مع الحرص على عدم إتلاف البيا. بعد ذلك ، قم بعمل شق على طول الطريق عبر الأنسجة بين الدماغ الأوسط والدماغ الخلفي لفصل الدماغ الخلفي ، بما في ذلك المخيخ. قم بعمل شقوق على طول الطريق عبر الأنسجة عند كل من التقاطعات الجانبية للمخيخ والصفيحة الخلفية للدماغ الخلفي. قم بإزالة المخيخ بالكامل ، مع الحرص على الحفاظ على سلامة البياء طوال فترة التشريح.

أخيرا ، قم بإزالة الضفيرة المشيمية المكونة وانقل المخيخ المفصل إلى HBSS المثلج. انقل المخيخ بالكامل إلى المنصة المعقمة لمفرمة المناديل باستخدام ملعقة أو ماصة باستور سعة 3 ملليلتر مع قطع الطرف لتوسيع الفتحة. قم بإزالة أي سائل زائد باستخدام ماصة.

اضبط سرعة قطع مفرمة المناديل على 50٪ من قيمتها القصوى. ثم قم بقطع المخيخ في الاتجاه المطلوب بسمك 300 ميكرومتر. باستخدام ماصة باستور سعة 3 ملليلتر ، قم بتغطية المخيخ المقطع في HBSS البارد.

بعد ذلك ، انقل HBSS والشرائح إلى طبق بتري بحجم 60 ملم يحتوي على 20 مل من HBSS المثلج ، باستخدام ماصة باستور سعة 3 مليلتر مع الطرف المقطوع. ضع طبق بتري تحت مجهر تشريح ، مضاء بمصدر ضوء من الألياف البصرية. بعد ذلك ، استخدم ملقط صانع الساعات لفصل شرائح فردية من أنسجة المخ.