تفريق الخلايا السلفية للأذن إلى خلايا ظهارية حسية متبوعة بالتلوين المناعي

JoVE Encyclopedia of Experiments

علم الأعصاب

0 مشاهدات • 3:55 د • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مزرعة خلد سلف الأذن متعدد القدرات ، أو iMOP ، الخلايا في الوسائط.

تسهل عوامل النمو في الوسائط تكاثر iMOP وتكوين المستعمرات ، مما يؤدي إلى إنشاء غلاف الأذن.

اجمع الغلاف الجوي واتركها تستقر بالجاذبية.

قم بإزالة الوسائط وإضافة وسائط التمايز التي تفتقر إلى عوامل النمو. لوحة الأذن.

يؤدي غياب عوامل النمو إلى بدء تمايز iMOP إلى خلايا ظهارية حسية.

اجمع الغلاف الجوي المتمايز واتركها تستقر.

قم بإزالة الوسائط وإضافة مثبت للحفاظ على التشكل الخلوي.

بعد ذلك ، أضف منظفا لاختراق الأغشية الخلوية والنووية.

أضف حاجزا مؤقتا لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

إدخال الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف علامة تمايز محددة.

أضف الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية ، والفالودين المسمى بالفلورسنت لصبغة الأكتين ، وصبغة ملزمة بالحمض النووي لتلطيخ النوى.

قم بتركيب الغلاف الأرضي.

باستخدام الفحص المجهري الفلوري ، تصور التلوين لتأكيد تمايز iMOP.

بعد ثلاثة أيام من الطلاء ، استخدم ترسيب الجاذبية لجمع الغلاف الجوي كما هو موضح سابقا. استمر في شفط المادة الطافية ، وأعد تعليق الخلايا برفق في 2 ملليلتر من وسط التمايز الظهاري الحسي. بعد ذلك، استخدم ماصة كبيرة التجويف سعة 10 ملليلتر لنقل الغلاف الجوي إلى طبق جديد بحجم 60 ملم. قم بتمييز الغلاف الجوي لمدة 10 أيام ، مع إضافة 2 مل من وسط التمايز الطازج إلى الثقافة كل يومين.

بعد ذلك ، قم بحصاد الغلاف الجوي مرة أخرى من خلال الجاذبية والترسيب وشفط الوسط المستهلك. بعد ذلك ، قم بإصلاح الغلاف الجوي في 4٪ بارافورمالدهيد في 1X PBS لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، قم بإزالة محلول الفورمالديهايد ، واغسل الخلايا في 1X PBS يحتوي على 0.1٪ Triton X-100. استمر في حجب الغلاف الجوي في 1X PBS ، مكملا بنسبة 10٪ مصل الماعز و 0.1٪ Triton X-100.

بعد ساعة واحدة ، استبدل المخزن المؤقت المانع بتلك التي تحتوي على التخفيف المناسب للجسم المضاد Cdkn1b أو Cdh1. بعد ذلك ، احتضان الخلايا في الجسم المضاد الأولي طوال الليل عند 4 درجات مئوية ، وفي اليوم التالي ، استمر في التلوين المناعي باستخدام الأجسام المضادة الثانوية المسماة بالفلورسنت ، والفالودين ، و Hoechst كما هو موضح في مكان آخر.

للتحضير للتصوير ، ضع وسط التثبيت على شريحة زجاجية ثم أدخل الغلاف الجوي الملون في الوسط. بعد ذلك ، ضع غطاء أعلى العينة. بعد ترك وسط التركيب يجف طوال الليل عند 4 درجات مئوية ، ضع الشريحة على مسرح المجهر المقلوب المزود بكاميرا CCD 16 بت. باستخدام هدف الهواء 20X 0.75 ، احصل على صور epifluorescence عن طريق جمع البيانات من القنوات الزرقاء والخضراء والحمراء والأشعة تحت الحمراء.

09:02

بروتوكول لتمييز الخلايا الجذعية المحفزة البشرية المستحثة في الثقافات المختلطة من الخلايا العصبية والجلد للاختبار العصبي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:48

التفريق بين الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية من الخلايا الجذعية Pluripotent المستحث أو الجنينية البشرية سريعة وموجهة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:48

تحريض غشائي التمايز في خلايا القلب السلف تحت ظروف المصل منخفضة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:11

تمايز الخلايا الجذعية الجنينية في السلائف Oligodendrocyte

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:19

عزل الخلايا الجذعية الأنف الشم من القوارض أو البشر

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:14

عزل LacZ - معربا عن خلايا من أنسجة الأذن الداخلية باستخدام الماوس التدفق الخلوي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

14:26

السلف المستمدة من نظام الثقافة دبقية قليلة التغصن من دماغ الجنين البشري

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:00

تمايز الخلايا الجذعية الجنينية البشرية إلى خلايا قليلة التغصن

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:14

تمييز أسلاف الأذن متعددة القدرات الخالدة إلى الخلايا العصبية العقدية الحلزونية وتقييم التمايز

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:03

ثقافة الجنينية الماوس القوقعة إإكسبلنتس وجين نقل من قبل Electroporation لل

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 22 أغسطس 2026