تفريق الخلايا السلفية للأذن إلى خلايا ظهارية حسية متبوعة بالتلوين المناعي

مزرعة خلد سلف الأذن متعدد القدرات ، أو iMOP ، الخلايا في الوسائط.

تسهل عوامل النمو في الوسائط تكاثر iMOP وتكوين المستعمرات ، مما يؤدي إلى إنشاء غلاف الأذن.

اجمع الغلاف الجوي واتركها تستقر بالجاذبية.

قم بإزالة الوسائط وإضافة وسائط التمايز التي تفتقر إلى عوامل النمو. لوحة الأذن.

يؤدي غياب عوامل النمو إلى بدء تمايز iMOP إلى خلايا ظهارية حسية.

اجمع الغلاف الجوي المتمايز واتركها تستقر.

قم بإزالة الوسائط وإضافة مثبت للحفاظ على التشكل الخلوي.

بعد ذلك ، أضف منظفا لاختراق الأغشية الخلوية والنووية.

أضف حاجزا مؤقتا لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

إدخال الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف علامة تمايز محددة.

أضف الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية ، والفالودين المسمى بالفلورسنت لصبغة الأكتين ، وصبغة ملزمة بالحمض النووي لتلطيخ النوى.

قم بتركيب الغلاف الأرضي.

باستخدام الفحص المجهري الفلوري ، تصور التلوين لتأكيد تمايز iMOP.

بعد ثلاثة أيام من الطلاء ، استخدم ترسيب الجاذبية لجمع الغلاف الجوي كما هو موضح سابقا. استمر في شفط المادة الطافية ، وأعد تعليق الخلايا برفق في 2 ملليلتر من وسط التمايز الظهاري الحسي. بعد ذلك، استخدم ماصة كبيرة التجويف سعة 10 ملليلتر لنقل الغلاف الجوي إلى طبق جديد بحجم 60 ملم. قم بتمييز الغلاف الجوي لمدة 10 أيام ، مع إضافة