تمييز أسلاف الأذن متعددة القدرات الخالدة إلى الخلايا العصبية العقدية الحلزونية وتقييم التمايز

خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على أغطية معقمة مطلية بركيزة زراعة الخلايا.

إدخال أسلاف الأذن متعددة القدرات الخالدة ، أو iMOPs ، في وسط التمايز العصبي.

iMOPs هي سلائف لخلايا الأذن الداخلية المختلفة ، بما في ذلك الخلايا العصبية العقدية الحلزونية ، أو SGNs ، التي تنقل المعلومات السمعية إلى الدماغ.

احتضان ، مما يسمح للخلايا بالالتصاق بالركيزة. يحفز الوسيط تمايز iMOPs إلى SGNs.

أضف مثبتا للحث على تشابك البروتين ، والحفاظ على مورفولوجيا الخلية ، ومحلول منظف لاختراق الأغشية الخلوية.

أدخل كاشف حجب لمنع وضع العلامات غير المحددة.

أضف الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروفور الخاصة بعلامات التمايز العصبي واحتضانها ، مما يسمح للأجسام المضادة بتسمية SGNs.

اغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة ، وقم بتركيب الأغطية بوسط تثبيت يحتوي على صبغة نووية فلورية.

باستخدام الفحص المجهري الفلوري ، اكتشف إشارات الأجسام المضادة لتأكيد تمايز iMOPs إلى SGNs.

أولا ، قم بتنظيف الأغطية الزجاجية المستديرة عن طريق وضعها في صفيحة معقمة مقاس 100 ملم ، وغمرها في 70٪ من الإيثانول. حرك الغطاء برفق للتأكد من تغطيته واترك الطبق في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، اشطف الغطاء ثلاث مرات في 1x PBS معقم ثم مرة واحدة بالماء المعقم.

بعد ذلك ، اترك الأغطية تجف عن طريق تعريضها للأشعة فوق البنفسجية في غطاء زراعة الأنسجة لم