ثقافة Ex Vivo وتصوير الشرائح الحركية للعين من أجنة الفئران المعدلة وراثيا
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:29 دقيقة • July 8th, 2025
خذ فأرة حامل معدلة وراثيا ، وعزل الرحم الذي يحتوي على أجنة جراحيا ، واغسله لإزالة الدم المتبقي.
قم بإزالة الأجنة التي تحتوي على الخلايا العصبية الحركية المصنفة بالفلورسنت وانقلها إلى غطاء صفيحة متعددة الآبار.
أضف الاغاروز المنصهر وقم بتبريد الغطاء للحث على تكوين الهلام ، وتضمين الأجنة.
تحت المجهر الفلوري ، قم بمحاذاة النوى الحركية للعين والعينين في خط وقم بقص الاغاروز الموازي للخط.
قم بتثبيت الجنين على مرحلة العينة وضعه في غرفة اهتزاز مملوءة بمخزن مؤقت للتقطيع على البارد.
باستخدام الاهتزاز ، قم بإنشاء شرائح تحتوي على النوى الحركية للعين والعينين. تشكل النوى الأعصاب الحركية للعين التي تتحكم في حركة العين.
انقل الشرائح إلى إدخالات الثقافة داخل صفيحة متعددة الآبار تحتوي على وسط ثقافة واحتضنها.
باستخدام المجهر الفلوري ، قم بالتصوير على فترات منتظمة لمراقبة الخلايا العصبية الحركية للعين المصنفة بالفلورسنت والتي تمتد المحاور للوصول إلى العينين.
قبل البدء في الإجراء ، أولا ، قم بتأكيد الحمل بالموجات فوق الصوتية في اليوم الجنيني 10.5 من التزاوج الموقوت. حصاد الأجنة ، ورش بطن الفأر الحامل بنسبة 70٪ من الإيثانول ، واستخدم المقص لفتح تجويف البطن لاستخراج الرحم. اغسل الرحم في طبق بتري من HBSS المثلج قبل وضع العضو في طبق بتري ثان من HBSS الطازج المثلج.
تحت مجهر تشريح ، قم بإزالة الأجنة من قرن ا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية