موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:15 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بلوحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا جذعية متعددة القدرات يسببها الإنسان ، أو iPSCs ، في وسط به مثبط Rho-kinase ، مما يعزز بقاء الخلايا.
استبدل الوسط بوسط أساسي يحتوي على العناصر الغذائية وعوامل النمو.
احتضان للسماح بتكاثر وتمايز iPSCs إلى خلايا سلائف.
استبدل هذا الوسيط بوسط تمايز مكمل بعوامل نمو الخلايا الليفية وحمض الريتينويك ، ثم احتضنها.
تسهل عوامل النمو تمايز الخلايا السليفة إلى خلايا بطانية الأوعية الدموية الدقيقة ، بينما يعزز حمض الريتينويك تخليق بروتينات التوصيل الضيقة.
اغسل الخلايا وعالجها بمحلول إنزيم EDTA لفصل الخلايا ، مما يؤدي إلى تكوين معلق أحادي الخلية.
جهاز طرد مركزي لجمع الخلايا وإزالة المادة الطافية. ثم أعد تعليق الخلايا في وسط تمايز جديد.
ضع معلق الخلية هذا في صفيحة متعددة الآبار مغطاة بالكولاجين وبروتينات الالتصاق.
احتضان للسماح بالتصاق الخلايا ، وتشكيل تقاطعات ضيقة بين الخلايا ، تشبه الخلايا البطانية للأوعية الدموية الدقيقة في الدماغ.
للحث على تمايز BMEC من iPSCs البشرية, غسل ثقافة iPSC المتقاربة مع DPBS مرة واحدة قبل احتضان الخلايا بالحجم المناسب من EDTA الأنزيمي لمدة خمس دقائق تقريبا عند 37 درجة مئوية.
عندما يتم الحصول على معلق أحادي الخلية ، اجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي ، وأعد تعليق الحبيبات في حجم مناسب من وسط الخلايا الجذعية ، مع استكمال 10 مثبطا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية