عزل واستزراع الخلايا من الدماغ الظهري الجانبي لجنين الفأر

خذ جنين فأر في مخزن مؤقت وافصل الجمجمة لعزل الدماغ.

قم بإزالة السحايا ، الطبقة الغشائية التي تغطي الدماغ.

تشريح الدماغ لفصل نصفي الكرة الأرضية.

عزل الدماغ الظهري الوحشي من نصفي الكرة الأرضية ونقلها إلى أنبوب.

الدماغ الظهري الوحشي غنية بالخلايا العصبية والخلايا السلفية العصبية.

جهاز الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية.

أضف محلول إنزيم. تقوم الإنزيمات بتكسير مصفوفة الأنسجة ، مما يؤدي إلى فك الخلايا.

أدخل وسط تكاثر يحتوي على مصل. تمنع بروتينات المصل نشاط الإنزيم.

استخدم ماصة لفصل الأنسجة ميكانيكيا ، وتشكيل معلق خلوي.

جهاز طرد مركزي وإزالة المادة الطافية التي تحتوي على إنزيمات معطلة وبقايا الأنسجة.

أعد تعليق الخلايا في وسط التكاثر.

انقل الخلايا إلى صفيحة دقيقة مطلية بالركيزة لزراعة الخلايا.

احتضان الخلايا للالتصاق بالركيزة. يسهل الوسيط تكاثر الخلايا السلفية.

ابدأ بإزالة الأدمغة من 5 إلى 10 أجنة E14 في طبق بتري مع وسط تشريح بارد. استخدم الملقط لسحب الجلد والجمجمة بعناية وعزل الدماغ. أثناء العمل تحت المجهر المجسم ، استخدم ملقط التشريح لإزالة السحايا. ثم قم بتقسيم telencephalon في المنتصف لفصل نصفي الكرة الأرضية.

لعزل telencephalon الظهري الجانبي قطع على طول منحنى الظهري والحدود السطحية تحت الجذعية. انقل الدماغ الظهري الوحشي إلى أنبوب سعة 2 مليلتر مع وسط تشريح على الجليد حتى يتم تشريح جمي