إنشاء ثقافة خلايا العقد الجذرية الجذرية الأولية من العمود الفقري للفئران

خذ العمود الفقري للفئران. قم بعمل قطعتين على جانبيها وقطع جانبي واحد.

إزالة العضلات الظهرية والجزء الظهري من الفقرات.

استخرج الحبل الشوكي.

تحديد العقد الجذرية الظهرية ، أو DRGs ، الموجودة بشكل ثنائي على طول الفقرات القطنية.

تحتوي DRGs على خلايا عصبية محاطة بالخلايا الدبقية.

استئصال DRGs وجمعها في طبق. اغسل المنديل بشكل متكرر بوسائط خالية من المصل.

انقل DRGs إلى صفيحة تحتوي على محلول كولاجيناز واحتضنها. الكولاجيناز يحط من المصفوفة خارج الخلية.

يغسل مع العازلة. أضف التربسين-EDTA واحتضن لتعطيل تقاطعات الخلايا والخلايا ، مما يؤدي إلى تخفيف الخلايا.

انقل DRGs إلى أنبوب ، وجهاز طرد مركزي ، وتخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الأنسجة في وسط المزرعة والماصة بشكل متكرر لتحرير الخلايا.

انقل الخلايا إلى لوحة ثقافة مطلية بالبوليمر جيدا لتسهيل الارتباط.

قم بإزالة الوسائط وإضافة وسائط جديدة تحتوي على مثبطات وعوامل نمو.

تحد المثبطات من تكاثر الخلايا الدبقية ، بينما تعزز عوامل النمو نمو الخلايا العصبية.

اجمع العقد الجذرية الظهرية القطنية من جذع فأر عمره أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع. ابدأ بعمل قطعتين على جانبي العمود الفقري وقطع جانبي واحد لتحديد المدى المنقاري للعمود الفقري القطني. ثم استخدم ملقط قطع العظام لإزالة العضلات الظهرية للعمود الفقري. بعد ذلك ، قم بإزالة الجزء الظهري من الفقرات وكشف الحبل الش