إصابة الخلايا العصبية الأولية للفأر في الدماغ المتوسط بفيروسات هندسية مرتبطة بالغدة

ابدأ بزراعة خلايا الدماغ المتوسط للفأر الجنيني على غطاء.

عالج بالفيروسات المكرسة المرتبطة بالغدة التي تشفر مركب مؤشر الكالسيوم الفلوري تحت محفز خاص بالخلايا العصبية.

احتضان للتعلق الفيروسي واستيعابه.

قم بإزالة الوسيط للقضاء على الفيروسات غير المرتبطة ، ثم أضف وسيطا للثقافة واحتضانه.

تطلق الفيروسات الداخلية جينومها في النواة ، حيث يقود المحفز الخاص بالخلايا العصبية إنتاج مجمعات مؤشر الكالسيوم حصريا في الخلايا العصبية الأولية.

تشتمل هذه المجمعات على بروتين فلوري مميز ببروتين مرتبط بالكالسيوم وببتيد M13.

انقل الغطاء إلى طبق به مخزن تخزين مؤقت غني بأيونات الكالسيوم، ثم ضعه في غرفة التسجيل للتصوير المباشر متحد البؤر.

أدخل المخزن المؤقت لتسجيل الغلوتامات ، مما يتسبب في ارتباط الغلوتامات بالقنوات الأيونية ، مما يؤدي إلى دخول أيونات الكالسيوم.

ترتبط هذه الأيونات بالمجمع ، مما يتسبب في حدوث تغيير توافقي وانبعاث فلورة.

في التصوير المباشر ، تشير الخلايا العصبية الساطعة إلى العدوى الفيروسية.

ابدأ بتحضير 1 ملليلتر من وسط DMEM الخالي من المصل مع 1 ميكرولتر من hSyn-GCaMP6f AAV لكل طبق. استنشق وسط زراعة الخلايا من كل طبق ، واستبدله ب 1 مليلتر من DMEM المحضر باستخدام hSyn-GCaMP6f. ضع الأطباق مرة أخرى في الحاضنة 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة.

بعد الحضانة ، قم بشفط الوسط باستخدام AAVs ، واستبدله ب 3