تمايز الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات إلى خلايا سلفية عصبية

خذ صفيحة دقيقة تحتوي على مزرعة ملتصقة من الخلايا الليفية الجنينية للفأر ، أو MEFs ، في وسط.

تعمل MEFs الملتصقة كطبقة مغذية ، مما يوفر بيئة مكروية داعمة لزراعة الخلايا.

قم بإزالة الوسط وأدخل الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية ، أو hiPSCs ، في وسط hiPSC مكمل بجزيئات صغيرة تعزز بقاء الخلية.

احتضان للسماح لمركبات الاحتجاز العالي للخلايا بالالتصاق بطبقة التغذية ، والتي تفرز عوامل النمو التي تسهل انتشار hiPSC.

قم بإزالة الوسط وأضف محلول إنزيم لفصل الخلايا. انقل الخلايا وقم بطردها المركزي ، ثم قم بإزالة المادة الطافية وإعادة تعليقها في وسط hiPSC.

انقل الخلايا إلى صفيحة مطلية بالبوليمر الحيوي. احتضان للسماح ل MEFs بالالتماسك.

انقل hiPSCs المعلقة إلى صفيحة دقيقة على شكل حرف V. الطرد المركزي للخلايا واحتضانها ، مما يؤدي إلى تكوين تراكم الخلية.

التجديد بوسيط التمايز. تسهل العناصر الغذائية للوسط وتفاعلات الخلية والخلية داخل الركام تمايز hiPSC إلى خلايا سلفة عصبية.

بالنسبة لهذا البروتوكول ، ابدأ بإنشاء خلايا مغذية. لإنشاء هذه الثقافة ، قم بوضع 600,000 خلية مغذية في كل بئر من صفيحة مكونة من ستة آبار ، مع 300 مل من الوسط لكل بئر. بعد زراعة الخلايا المغذية لمدة 48 ساعة ، استبدل الوسط ، واحتضن الألواح لمدة ساعة ، أثناء تحضير الخلايا الجذعية.

قم بإذابة الخلايا الجذعية في حمام مائي 37 در