تطوير وصيانة الأجسام الجنينية الخالية من المصل

ابدأ بخلية سلف عصبية تحتوي على بئر أو مجاميع NPC في تمييز الوسائط -1 أو DM-1.

هذه الشخصيات غير القابلة للعب هي سلائف للسلالة العصبية المتولدة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية أو hiPSCs باستخدام DM-1 في ظل ظروف خاضعة للرقابة.

انقل مجاميع NPC إلى ملحق غشاء يوضع داخل بئر يحتوي على DM-1 وقم بإزالة الوسائط الزائدة.

قم بتغيير الوسيط إلى DM-2 واحتضانه.

يوفر DM-2 العناصر الغذائية وعوامل التمايز التي تعزز نضوج الشخصيات غير القابلة للعب إلى أنواع مختلفة من الخلايا العصبية.

تتحول الشخصيات غير القابلة للعب غير المتمايزة إلى أجسام جنينية ، تعرف باسم الأجسام الجنينية الخالية من المصل أو SFEBs ، حيث تفتقر الوسائط إلى المصل. تشبه هذه الدرجات الصوتية مورفولوجيا الدماغ النامي.

انقل الملحق إلى بئر يحتوي على DM-3.

يحتوي DM-3 على عوامل النمو الضرورية للحفاظ على ونمو SFEBs.

احتضن حتى تصل SFEBs إلى الحجم المطلوب.

بعد أسبوعين من زراعة الخلايا ، قم بإعداد ستة أطباق بستة آبار مع إدخالات ثقافة الخلايا 40 ميكرون ، و 1 مليلتر من وسط DM1. احتضان هذه الألواح لمدة أربع ساعات على الأقل قبل إضافة الخلايا المستنبتة.

بعد ذلك ، باستخدام طرف ماصة واسع الفم سعة 200 ميكرولتر ، اجمع مجاميع الخلايا البالغة من العمر أسبوعين مع حوالي 20 ميكرولترا من المتوسط. انقل أربعة إلى ستة مجاميع على كل ملحق بأقل قدر من المحلول. قم بإزالة أي فائض.

خلال هذه الخطوة ، من المهم العمل بسرعة وبيد ثابتة. أثناء إزالة الوسيط من حول SFEBs ، قد ترى SFEBs تتحرك عبر المحلول بسبب التوتر السطحي. لا بأس في إعادة موضعها بعد إزالة الوسيط.

بمجرد تحميل جميع الركام على الإدخالات ، قم بتغيير الوسط إلى 1 مليلتر من DM2 واستمر في زراعة الخلايا. كل يومين استبدل 3/4 الوسط بوسط طازج. بعد 14 يوما من الثقافة ، ابدأ في إضافة وسيط DM3 إلى الثقافات. استمر في الزراعة لمدة 16 يوما أخرى لتنمية SFEBs.