تطوير وصيانة الأجسام الجنينية الخالية من المصل

ابدأ بخلية سلف عصبية تحتوي على بئر أو مجاميع NPC في تمييز الوسائط -1 أو DM-1.

هذه الشخصيات غير القابلة للعب هي سلائف للسلالة العصبية المتولدة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية أو hiPSCs باستخدام DM-1 في ظل ظروف خاضعة للرقابة.

انقل مجاميع NPC إلى ملحق غشاء يوضع داخل بئر يحتوي على DM-1 وقم بإزالة الوسائط الزائدة.

قم بتغيير الوسيط إلى DM-2 واحتضانه.

يوفر DM-2 العناصر الغذائية وعوامل التمايز التي تعزز نضوج الشخصيات غير القابلة للعب إلى أنواع مختلفة من الخلايا العصبية.

تتحول الشخصيات غير القابلة للعب غير المتمايزة إلى أجسام جنينية ، تعرف باسم الأجسام الجنينية الخالية من المصل أو SFEBs ، حيث تفتقر الوسائط إلى المصل. تشبه هذه الدرجات الصوتية مورفولوجيا الدماغ النامي.

انقل الملحق إلى بئر يحتوي على DM-3.

يحتوي DM-3 على عوامل النمو الضرورية للحفاظ على ونمو SFEBs.

احتضن حتى تصل SFEBs إلى الحجم المطلوب.

بعد أسبوعين من زراعة الخلايا ، قم بإعداد ستة أطباق بستة آبار مع إدخالات ثقافة الخلايا 40 ميكرون ، و 1 مليلتر من وسط DM1. احتضان هذه الألواح لمدة أربع ساعات على الأقل قبل إضافة الخلايا المستنبتة.

بعد ذلك ، باستخدام طرف ماصة واسع الفم سعة 200 ميكرولتر ، اجمع مجاميع الخلايا البالغة من العمر أسبوعين مع حوالي 20 ميكرولترا من المتوسط. انقل أربعة إلى ستة مجاميع على كل ملحق بأقل قدر من