بناء دوائر عصبية منقوشة على مصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية

خذ مصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية نظيفة ومعقمة ، أو MEA ، وهو جهاز يحتوي على أقطاب كهربائية دقيقة للحصول على الإشارات العصبية وتوصيلها.

قم بتوصيل استنسل بوليمري منقوش بمعالج دقيق وضعه على سطح MEA.

تحت المجهر ، قم بمحاذاة الاستنسل المزخرف مع أقطاب MEA وإرفاقه لإنشاء وحدات.

قم بإزالة أداة المعالجة الدقيقة.

انقل MEA إلى غرفة مفرغة. أضف محلول مصفوفة إلى الاستنسل وقم بتطبيق فراغ لضمان طلاء مصفوفة متساو.

دع المصفوفة تجف.

قم بإزالة الاستنسل وتعقيم MEA عن طريق تعريضه للأشعة فوق البنفسجية.

أضف الخلايا العصبية إلى مركز MEA واسمح للخلايا بالالتصاق بطبقة المصفوفة.

بعد ذلك ، أضف وسائط النمو واحتضنها.

العناصر الغذائية من الوسائط والمصفوفة خارج الخلية الخلايا من النمو وتوسيع الإسقاطات ، وتشكيل دوائر عصبية منقوشة مترابطة يمكن تسجيل إشاراتها باستخدام MEA.

أولا ، قم بتنظيف مجموعة الأقطاب الكهربائية المتعددة عن طريق غسلها تحت ماء الصنبور ، ثم صوتنة في منظف إنزيمي مركز. كرر هذه الخطوات ثلاث مرات. ثم صوتنة MEA في الماء المقطر النقي ثلاث مرات. بعد ذلك ، تحت غطاء ، اغسل MEA بالماء المقطر قبل تعقيمه بالأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة.

الآن ، قم بإرفاق استنسل بمعالج دقيق معد. تحت المجهر المقلوب ، افحص الهيكل المزخرف وقم بمحاذاة لمطابقة أقطاب MEA. بعد ذلك ، استخدم المعالج الدقيق لخفض الاستنسل إلى سطح MEA. بمجرد توصيله ، ارفع المعالج الدقيق. الآن ، انقل MEA إلى غرفة التفريغ لمدة 15 دقيقة. بعد ذلك ، ضع قطرة 1 مليلتر من PDL على الاستنسل ، وأعده إلى غرفة التفريغ لمدة دورتين مدة كل منهما 20 دقيقة.

دع PDL يجف طوال الليل. في اليوم التالي ، قم بإزالة استنسل PDMS من MEAs باستخدام الملقط. أخيرا ، قم بتعقيم المتوسطات البيضية للأشعة فوق البنفسجية لمدة 7 دقائق. ثم يكونون جاهزين للخلايا. في التحضير ، قم بزراعة الخلايا وإعداد المعلقات كما في بروتوكول النص. بعد إعادة تعليق العدد المطلوب من الخلايا ، قم بوضعها في وسط المنطقة المزخرفة في MEA أو الغطاء ، ويجب تحميل MEA بأحجام 100 ميكرولتر ، ويستوعب الغطاء 1,000 ميكرولتر. احتضان الخلايا المطلية لمدة 40 دقيقة. ثم أضف وسط الطلاء.

للحفاظ على الخلايا كل 4 أيام ، أضف وسط النمو المكمل الطازج. بعد اليوم السادس أو السابع ، يجب أن تبدأ الوصلات العصبية بين الوحدات في التكون.