موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 1:58 دقيقة • July 8th, 2025
خذ مزرعة خلوية تحتوي على خلايا سرطانية عصبية متصلة بغطاء وحافظ عليها في ظروف باردة.
قم بإزالة وسط الثقافة وغسل الخلايا بشكل متكرر باستخدام محلول الفوسفات البارد للتخلص من الوسط المتبقي.
أضف عازلة تحلل تحتوي على تركيز منخفض من المنظفات غير الأيونية ومثبطات الأنزيم البروتيني.
يعطل المنظف غير الأيوني غشاء الخلية لبدء التحلل.
وفي الوقت نفسه ، تمنع مثبطات الإنزيم البروتيني الخلوية ، مما يحمي البروتينات من التحلل الأنزيمي.
بعد ذلك ، استخدم مكشطة الخلية لإخراج الخلايا المحللة جزئيا من الغطاء.
انقل المحتويات إلى أنبوب يحتوي على عازلة التحلل.
في ظل الظروف الباردة ، استخدم الخالط لتحلل الخلايا ميكانيكيا ، مما يضمن تحلل الخلايا الكامل وإطلاق البروتين.
الطرد المركزي محللة الخلية.
اجمع المادة الطافية في أنبوب جديد.
البروتينات المستخرجة من الخلايا السرطانية العصبية جاهزة الآن لمزيد من التحليل.
للتحقق من صحة تعبير البروتين ، بعد 48 ساعة من التعداء ، ضع أطباق المزرعة على الثلج واغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS. عالج الخلايا في كل طبق ب 200 إلى 400 ميكرولتر من محلول التحلل ، واستخدم مكشطة الخلايا لإزالة الخلايا من الغطاء.
انقل الخلايا المنفصلة من كل لوحة إلى أنابيب طرد مركزي دقيقة فردية ، وقم بفصل الخلايا بالخالط تحت الجليد. بعد دقيقة واحدة ، قم بتقطيع قطع الخلية المتجانسة عن طريق الطرد المركزي.