موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:58 دقيقة • July 8th, 2025
خذ ثقافة الخلايا النجمية وقم بإزالة الوسط. أضف عازلة فسيولوجية واحتضن على الجليد ، مما يثبط الالتقام الخلوي لبروتينات سطح الخلية.
احتضان بكاشف البيوتينيل الذي يربط بروتينات سطح الخلية.
بعد ذلك ، احتضن مع مخزن مؤقت للتبريد لإلغاء تنشيط أي كاشف غير متفاعل.
أضف عازلة فسيولوجية باردة وافصل الخلايا ميكانيكيا. انقل الخلايا ، ثم جهاز الطرد المركزي وتخلص من المادة الطافية.
احتضان مع مخزن مؤقت للتحلل للخلايا ، وإطلاق بروتينات داخل الخلايا على سطح الخلية الحيوية وغير الحيوية.
جهاز الطرد المركزي ، وجمع المادة الطافية ، وفصل جزء من محتوى البروتين الكلي.
احتضان الجزء المتبقي تحت التحريض بالخرز المطلي بالستربتافيدين الذي يربط البروتينات الحيوية.
قم بتدوير الخرزات المرتبطة بالبروتين على سطح الخلية وافصل المادة الطافية التي تحتوي على بروتينات داخل الخلايا.
اغسل الخرزات تحت التحريض لإزالة البروتينات غير المرتبطة على وجه التحديد ، ثم قم بالطرد المركزي وتخلص من المادة الطافية ، وعزل بروتينات سطح الخلية.
الكسور التي تحتوي على البروتينات الكلية وداخل الخلية وسطح الخلية جاهزة للتحليل.
لبدء هذا الإجراء ، قم بإزالة مزارع الخلايا النجمية من الحاضنة وتخلص من الوسط عن طريق الشفط. اغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام 4 ملليلتر من CM-PBS المبرد ، وضع الأطباق على الثلج المجروش.
قم بإزالة CM-PBS عن طريق الشفط ، ثم قم
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية