موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:45 دقيقة • July 8th, 2025
خذ الخلايا العصبية القشرية الأولية للفئران في طبق زجاجي مطلي بالبوليمر.
إصلاح الخلايا العصبية مع بارافورمالدهايد للحفاظ على الهياكل الخلوية.
اغسل الزائدة بارافورمالدهايد.
أضف منظفا غير أيوني لاختراق الخلايا.
عالج الخلايا بصبغة فلورية خضراء تستهدف البروتين الهيكلي الأكتين الخيطي ، أو F-actin.
قم بإزالة البقعة الزائدة.
ضع عامل مانع لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحدد.
احتضان بالأجسام المضادة الأولية التي تستهدف البروتينات المتغصنة.
قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
أضف الأجسام المضادة الثانوية الحمراء المترافقة بالفلوروفور للارتباط بالأجسام المضادة الأولية. اغسل الأجسام المضادة الزائدة.
ضع صبغة فلورية لتلطيخ النوى. قم بإزالة الصبغة غير المقيدة.
أضف كاشفا مضادا للبهتان لمنع التبييض الضوئي بالفلوروفور.
باستخدام الفحص المجهري الفلوري ، التقط صورا للخلايا العصبية.
حدد المنطقة الغنية بالأكتين الفاوي داخل التغصنات المسماة.
باستخدام البرنامج ، قم بحساب نقاط F-actin أو البقع وتتبع طول التغصنات يدويا لحساب كثافة F-actin.
قم بإصلاح الخلايا بنسبة 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، متبوعا بغسلتين من PBS. بعد ذلك ، قم باختراق الخلايا بنسبة 0.1٪ Triton X-100 في PBS لمدة 5 دقائق وقم بتسميتها ببقعة خاصة ب F-actin في درجة حرارة الغرفة. بعد 20 دقيقة ، اشطف الخلايا مرتين با
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية