موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 1:59 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بثقافة الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية الأولية للفأر.
أضف تركيزات عالية من N-methyl-D-aspartate ، أو NMDA ، ناهض مستقبلات الناقل العصبي المثير ، والجلايسين ، ناهض مشارك. احتضان الثقافة.
يرتبط NMDA و glycine بمواقعهما على مستقبلات NMDA ، مما يؤدي إلى الإفراط في التحفيز والتسبب في تدفق هائل لأيونات الكالسيوم.
ينشط الكالسيوم المتزايد داخل الخلايا الفوسفوليباز المعتمد على الكالسيوم ، والذي يؤدي إلى تحلل الدهون الفوسفورية في غشاء الخلية ، مما يؤدي إلى تلف الغشاء.
بالإضافة إلى ذلك ، ينشط الكالسيوم داخل الخلايا البروتياز الذي يتحلل البروتينات الخلوية.
تؤديمستويات الكالسيوم المرتفعة أيضا إلى إجهاد الميتوكوندريا وتجزئتها ، مما يؤدي إلى إطلاق أنواع الأكسجين التفاعلية ، أو ROS ، والتسبب في الإجهاد التأكسدي.
علاوة على ذلك ، ينشط الكالسيوم داخل الخلايا DNases ، والتي ، جنبا إلى جنب مع أنواع الأكسجين التفاعلية ، تسبب تلف الحمض النووي ، مما يؤدي في النهاية إلى موت الخلايا العصبية.
استبدل الوسط بوسط جديد بدون NMDA والجلايسين لإيقاف سلسلة الإشارات.
نموذج إصابة الخلايا العصبية الناجم عن NMDA جاهز لمزيد من التحليل.
للحث على السمية العصبية باستخدام NMDA ، بعد سبعة أيام في المختبر ، عالج الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية ب 100 ميكرومولار NMDA و 10 ميكرومولار جلايسين لمدة ساعة واحدة. ثم استبدل الوسيط بوسط مكيف من الثقافات المتوازية بدون معالجة. ينتج عن هذا التركيز موت الخلايا بنسبة 50٪ بعد 24 ساعة من العلاج.