JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:59 د • July 8th, 2025
خذ تعليقا من الفيروس المضخم للخلايا في الفئران ، المعدل وراثيا للتعبير عن بروتين فلوري أخضر محسن ، مما يسمح بالتصور.
قم بتحميل التعليق في حقنة بإبرة متصلة.
بعد ذلك ، قم بتخدير جرو الفأر عن طريق وضعه على الجليد.
حدد موقع الحقن على رأس الجرو.
أدخل الإبرة بشكل عمودي على سطح الجمجمة حتى تصل إلى البطين الجانبي أو السائل النخاعي أو التجويف المملوء بالسائل الدماغي النخاعي في الدماغ.
حقن المعلق في البطين الجانبي.
اسمح للجرو بالتعافي.
يدور الفيروس المحقون عبر السائل الدماغي النخاعي البطيني ، ويصل إلى الخلايا البطانية العصبية في المنطقة الهامشية والخلايا الظهارية للضفيرة المشيمية.
يرتبط الفيروس بالمستقبلات السطحية على هذه الخلايا ، ويستوعب ، ويخضع للتكاثر ، وينتشر من خلية إلى أخرى ، مما يؤدي إلى إصابة حادة في الضفيرة المشيمية والمنطقة الهامشية والمنطقة تحت البطينية.
ابدأ بتعقيم حقنة سعة 10 ميكرولتر وإبرة قياس 27 بنسبة 70٪ كحول. بعد ذلك ، قم بتحميل 5 ميكرولترات من محلول حقن الفيروس المضخم للخلايا في الفئران أو الميكروبيدات الفلورية في الإبرة عن طريق سحب مكبس المحقنة بعناية.
بعد تخدير فأر حديثي الولادة P0.5 وتثبيته عن طريق وضعه على الجليد لمدة ثلاث إلى أربع دقائق، استخدم طريقة الاستجابة لقرص إصبع القدم لتحديد عمق التخدير. وضع علامة على موقع الحقن على الفأر المخدر بقلم مختبر غير سام في مكان يتراوح بين 0.7 و1.0 ملليمتر تقريبا من الخيط السهمي، ومن 0.7 إلى 1.0 ملليمتر ذيلية من الخياطة الوليدية. يوضح هذا الرسم البياني الموقع بمزيد من التفصيل.
كمرجع ، ضع علامة على بعد 2 ملم من طرف الإبرة بعلامة غير سامة. بعد ذلك ، أدخل الإبرة بعمق 2 ملم ، عموديا على سطح الجمجمة في موقع الحقن المحدد. بعد ذلك ، قم بحقن 5 ميكرولترات ببطء من الفيروس المضخم للخلايا الفئران في البطين الجانبي دون فتح فروة الرأس.
في مجموعة أخرى من الفئران ، قم بحقن محلول سعة 5 ميكرولتر يحتوي على ميكروبيدات الفلورسنت بنفس الطريقة. بعد الحقن ، اترك الإبرة في مكانها لمدة 10 إلى 20 ثانية لمنع التدفق العكسي. ثم قم بإزالة الإبرة ببطء. اسمح للحيوانات المحقونة بالتعافي لمدة 5 إلى 10 دقائق في وعاء دافئ حتى تتم استعادة الحركة والاستجابة العامة.