موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:08 دقيقة • July 8th, 2025
خذ أقساما عضوية مخيخية ثابتة تشتمل على أنواع مميزة من الخلايا العصبية المخيخية.
اغسل الأقسام في المخزن المؤقت لإزالة وسائط التضمين المتبقية.
احتضان الجلايسين لمنع المواقع التفاعلية المتبقية من التثبيت ، مما يقلل من الارتباط غير المحدد أثناء التلوين المناعي.
أضف منظفا غير أيوني لاختراق الخلايا.
يغسل بالعازلة ، ويزيل المنظفات الزائدة.
الآن ، جفف الشريحة. انقله إلى طبق تلطيخ مناعي بورق مبلل بالمخزن لمنع جفاف الأنسجة.
تطبيق محلول حجب يرتبط بمواقع غير محددة على الخلايا العصبية.
قم بإزالة محلول الحظر. احتضان الأجسام المضادة الأولية ، والتي ترتبط بالمستضدات المستهدفة داخل الخلايا العصبية المخيخية.
يغسل بالعازلة ، ويزيل الأجسام المضادة غير المرتبطة.
احتضان الأجسام المضادة الثانوية المرتبطة بالفلوروفور لربط الأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالمستضد.
ثم اغسل بالعازلة ، وإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
أضف صبغة لتلطيخ النوى الخلوية.
باستخدام الفحص المجهري الفلوري ، تصور العلامات المعبر عنها في الخلايا العصبية المخيخية ، مما يشير إلى النضج العضوي.
اغسل شرائح المجهر التي تحتوي على الأقسام العضوية ب 50 مل من 1X PBS لمدة خمس دقائق. بعد ذلك ، انقل الشرائح إلى جرة Coplin تحتوي على 1X PBS طازج. انقل الشرائح إلى برطمان كوبلين يحتوي على 50 مل من الجلايسين الطازج ، واحتضنه لمدة 10 دقائق في درجة حرا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية