تطوير نموذج في المختبر لعدوى فيروس زيكا في العضيات الدماغية

خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على عضيات دماغية بشرية في وسط تحريض عصبي.

تحتوي العضيات على خلايا جذعية ، وخلايا دبقية شعاعية ، وخلايا سلفية عصبية أو NPCs ، وخلايا عصبية مرتبة في نمط شعاعي يسمى وردة ، تحاكي الدماغ النامي.

قم بإزالة الوسيط وغسل العضيات بمخزن مؤقت.

أضف فيروس زيكا المعلق في مخزن مؤقت إلى آبار الاختبار وقم بالتخزين المؤقت فقط لآبار التحكم.

احتضان ، مما يسمح للفيروس بالارتباط بمستقبلاته على الشخصيات غير القابلة للعب ويصبح داخليا.

اغسل لإزالة الفيروسات غير الداخلية ، ثم أضف وسيط الحث العصبي الجديد واحتضانه.

تستخدم

الفيروسات الداخلية آلية الخلية المضيفة لتكوين جزيئات فيروسية جديدة.

يؤدي

التكاثر الفيروسي إلى استجابة الإجهاد الخلوي التي تحفز موت الخلايا المبرمج ، مما يقلل من عدد الشخصيات غير القابلة للعب المتاحة لتطوير العضوية.

بمرور الوقت ، تظهر العضيات المصابة حجما منخفضا وتعطلا في التشكل ، مما يعكس نمو الدماغ غير الطبيعي لدى البشر المصابين بفيروس زيكا.

أحضر محلول الملح المتوازن 1X من Earle و 1X PBS ووسط الحث العصبي إلى 37 درجة مئوية في حمام الماء الساخن. بعد ذلك ، قم بتخفيف فيروس زيكا بتركيز معروف في محلول 1X Earle إلى تعدد العدوى المستهدف الذي يتراوح عادة بين 0.1 و 10. باستخدام ماصة P200 ، قم بإزالة كل الوسائط بعناية من كل بئر عضوي ، ثم اغسل العضيات بسرعة باستخدام 200 ميكرولتر من 1X PBS الدافئ.

عند إزالة الوسائط من كل بئر ، من الأهمية بمكان ألا يلمس المرء العضوي أو يمتصه في الماصة. هذا يمكن أن يسبب أضرارا لا يمكن إصلاحها للعضوية. إذا حدث هذا ، فمن الأفضل التخلص من العضوية.

بعد ذلك، قم بإزالة كل السائل المتبقي بعناية من كل بئر عضوي باستخدام ماصة P200 أحادية القناة. بعد ذلك ، أضف بسرعة 50 ميكرولترا من محلول إيرل 1x لعدوى وهمية أو محلول فيروس زيكا لكل بئر. تأكد من أن كل عضوية مغمورة بالكامل. عند الانتهاء ، ضع اللوحة مرة أخرى في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة ساعتين.

بعد اكتمال التعرض الفيروسي. اغسل كل بئر من العضيات ب 200 ميكرولتر من PBS. اسمح للعضيات بالاستقرار لمدة 15 ثانية، ثم قم بإزالة PBS باستخدام ماصة P200 أحادية القناة. أخيرا ، أضف 200 ميكرولتر من وسط الحث العصبي الجديد إلى كل بئر ، ثم ضع اللوحة مرة أخرى في الحاضنة.