تقييم صلاحية الخلايا العصبية في ثقافة الخلايا العصبية المخيخية عن طريق التلوين المزدوج

ابدأ بلوحة مزرعة معالجة بعامل مضاد للانقسام يمنع نمو الخلايا الدبقية ، تاركا في المقام الأول الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية وعددا صغيرا من الخلايا الدبقية.

قم بإزالة الوسط وأضف ببطء المحلول الملحي المخزن بالفوسفات البارد أو PBS للحفاظ على صلاحية الخلية.

استبدل المخزن المؤقت بخليط تلطيخ بارد واحتضانه.

يحتوي هذا الخليط على ثنائي أسيتات الفلورسين أو FDA ، وهو مركب غير فلوري ، ويوديد البروبيديوم أو PI ، وهي صبغة فلورية غير منفذة للغشاء.

تنتشر إدارة الغذاء والدواء في الخلايا ، حيث يقوم الإستراز الوظيفي في الخلايا الحية بتحويله إلى مركب فلوري أخضر.

يدخل PI في الخلايا الميتة من خلال الأغشية التالفة ، ويرتبط بالحمض النووي ، وينبعث منه مضان أحمر.

قم بإزالة محلول التلوين وأضف PBS البارد لمنع الخلايا من الجفاف.

احصل على صور الفلورسنت لبقع FDA و PI وصورة تباين الطور. دمج صور إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) وPI.

ثم قارن هذه الصورة المضان مع صورة تباين الطور ، مما يساعد على استبعاد الخلايا الدبقية الكبيرة.

يشير التألق الأحمر إلى موت الخلايا العصبية ، بينما يشير التألق الأخضر إلى قابلية الخلايا العصبية.

ابدأ التلوين بخلط ثنائي أسيتات الفلوريسئين إلى تركيز نهائي قدره 10 ميكروغرام لكل مليلتر ويوديد البروبيديوم إلى تركيز نهائي يبلغ 50 ميكروغرام لكل مليلتر في 10 ملليلتر من PBS. امزج محلول FDA