موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 5:20 دقيقة • July 8th, 2025
ضع أدمغة ذبابة الفاكهة البرية والمتحورة في محلول يحتوي على مثبت ومنظف. احتضن مع هزاز لطيف.
يحافظ المثبت على مورفولوجيا الأنسجة ، بينما يتخلل المنظف أغشية الخلايا.
اسمح للأدمغة بالاستقرار ، ثم قم بإزالة المحلول.
اغسل الأنسجة بمخزن مؤقت.
أضف محلول حجب لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحدد.
قم بإزالة المحلول وأضف الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتينا معينا ينظم التطور المحوري في جسم الفطر في الدماغ، أو الخلايا العصبية MB.
احتضان لتعزيز ارتباط الأجسام المضادة.
يغسل بمحلول عازل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
احتضان الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية.
اغسل مرة أخرى لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة ، ثم أعد تعليق الدماغ في وسط تصاعد.
قم بتركيب الأدمغة على شريحة جسر وتصورها تحت المجهر الفلوري.
بالمقارنة مع النوع البري ، تظهر الأدمغة الطافرة نمطا ظاهريا معيبا ، مع إسقاطات خاطئة محورية وفصوص MB مفقودة.
تحت المجهر ، استخدم ماصة P200 لنقل 10 إلى 15 دماغا مقطعا في نفس النمط الجيني إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 0.5 ملليلتر مملوء بنسبة 4٪ بارافورمالدهيد مخفف في PTN. ثم احتضان الأدمغة لمدة 20 دقيقة مع التأرجح البطيء في درجة حرارة الغرفة. بعد التثبيت ، اسمح للأدمغة بالاستقرار في قاع الأنبوب ، ثم قم بإزالة المثبت.
بعد ذلك ، قم بإجراء غسل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية