JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:28 د • July 8th, 2025
خذ يرقات سمك الزرد المخدر في طبق مبطن بهلام الاغاروز وتأكد من أن الدماغ متجها لأعلى للحقن.
ضع الطبق تحت المجهر لتصور بطينات الدماغ ، وهي تجاويف مملوءة بالسوائل داخل الدماغ النامي.
خذ إبرة حقن مجهرية تحتوي على محلول عديدات السكاريد الدهنية ، أو LPS ، وهو مكون بكتيري لتحفيز الاستجابة المناعية.
ضع الإبرة فوق الجزء العلوي من الدماغ ، وهي منطقة تحتوي على الخلايا العصبية والخلايا المناعية المقيمة ، وخاصة الخلايا الدبقية الصغيرة.
ثقب الدماغ بالإبرة وحقن محلول LPS في البطين.
ترتبط الخلايا الدبقية الصغيرة في الأنسجة المحيطة ب LPS من خلال مستقبلات شبيهة بالحصان.
يؤديالارتباط إلى إطلاق السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، والتي تجند العدلات في الموقع ، مما يؤدي إلى التهاب الأعصاب.
تولد العدلات رشقات نارية من أنواع الأكسجين التفاعلية وتطلق إنزيمات محللة للبروتين ، مما يؤدي إلى موت الخلايا العصبية.
انقل اليرقات الناجمة عن الالتهاب العصبي إلى وسط استزراع للحفاظ عليها لإجراء فحوصات المصب.
قم بإعداد جهاز المعالجة الدقيقة بحيث يكون طرف الإبرة لجهاز الحقن المجهري في نفس مجال الرؤية مثل اليرقات عند التكبير العالي. قم بإذابة محلول 2٪ agarose في ماء مقطر مزدوج باستخدام الميكروويف. صب الاغاروز المنصهر في طبق بلاستيكي. استخدم ماصة نقل بلاستيكية لنقل اليرقات المخدرة إلى وسط طبق بلاستيكي مغطى بالأغاروز بنسبة 2٪.
قم بتوجيه اليرقات المثبتة بحيث يكون جانب الدماغ لأعلى للوصول إلى الإبرة. اضبط تكبير المجهر بحيث يتم عرض الهيكل البطيني للدماغ لأسماك الزرد بوضوح في مجال الرؤية. ضع الإبرة بعناية فوق جهاز الدماغ. نظف منطقة الدماغ بنسبة 70٪ من الإيثانول ، واثقب جلد دماغ سمكة الزرد بطرف الإبرة ببطء باستخدام أداة المعالجة الدقيقة.
اضغط على دواسة القدم لإخراج نانولتر واحد من 1X PBS أو تركيزات مختلفة من عديدات السكاريد الدهنية. انقل اليرقات إلى وسط E3 نظيف مباشرة بعد الحقن.