JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 1:59 د • July 8th, 2025
خذ مزرعة الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية الأولية للفأر.
أضف الوسائط التي تحتوي على بيروكسيد الهيدروجين ، وهو نوع من الأكسجين التفاعلي أو ROS ، واحتضنه لفترة وجيزة.
ينتشر بيروكسيد الهيدروجين في الخلايا ويتحول إلى جذور حرة عالية التفاعل.
تحفز هذه الجذور بيروكسيد الدهون ، مما يعرض سلامة غشاء الخلية للخطر.
بالإضافة إلى ذلك ، تسبب الجذور تعديلات مؤكسدة في البروتينات الخلوية ، مما يضعف وظيفتها.
علاوة على ذلك ، فإنها تحفز فواصل الحمض النووي ، مما يؤدي إلى عدم الاستقرار الجيني.
تسبب الجذور أيضا أضرارا تأكسدية للعضيات داخل الخلايا ، بما في ذلك الميتوكوندريا.
ردا على ذلك ، تطلق الميتوكوندريا التالفة السيتوكروم c ، الذي يرتبط بعامل تنشيط البروتياز موت الخلايا المبرمج -1 ، مما يؤدي إلى تكوين المبرمج وتحويل برو كاسباز -9 إلى كاسباز 9 النشط.
ينشط Caspase 9 كاسباسات الجلاد ، مما يزيد من شق البروتينات الخلوية ويؤدي إلى موت الخلايا العصبية موت الخلايا المبرمجة.
استبدل الوسائط بوسائط جديدة خالية من بيروكسيد الهيدروجين لإيقاف سلسلة الإشارات.
لموت الخلايا الناجم عن ROS ، عالج الخلايا العصبية ببيروكسيد الهيدروجين عند 75 إلى 100 ميكرومولار لمدة خمس دقائق. بعد خمس دقائق ، قم بتبديلها إلى الوسائط المكيفة من الثقافات المتوازية.
نظرا لعدم استقرار بيروكسيد الهيدروجين ، يجب تحسين التركيز إلى مستوى يؤدي إلى موت الخلايا بنسبة تتراوح بين 50٪ و 70٪ بعد 24 ساعة. عادة ما يتراوح هذا التركيز بين 75 و 100 ميكرومولار.