نمذجة الموت العصبي الناجم عن أنواع الأكسجين التفاعلية في الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية للفأر

خذ مزرعة الخلايا العصبية الحبيبية المخيخية الأولية للفأر.

أضف الوسائط التي تحتوي على بيروكسيد الهيدروجين ، وهو نوع من الأكسجين التفاعلي أو ROS ، واحتضنه لفترة وجيزة.

ينتشر بيروكسيد الهيدروجين في الخلايا ويتحول إلى جذور حرة عالية التفاعل.

تحفز هذه الجذور بيروكسيد الدهون ، مما يعرض سلامة غشاء الخلية للخطر.

بالإضافة إلى ذلك ، تسبب الجذور تعديلات مؤكسدة في البروتينات الخلوية ، مما يضعف وظيفتها.

علاوة على ذلك ، فإنها تحفز فواصل الحمض النووي ، مما يؤدي إلى عدم الاستقرار الجيني.

تسبب الجذور أيضا أضرارا تأكسدية للعضيات داخل الخلايا ، بما في ذلك الميتوكوندريا.

ردا على ذلك ، تطلق الميتوكوندريا التالفة السيتوكروم c ، الذي يرتبط بعامل تنشيط البروتياز موت الخلايا المبرمج -1 ، مما يؤدي إلى تكوين المبرمج وتحويل برو كاسباز -9 إلى كاسباز 9 النشط.

ينشط Caspase 9 كاسباسات الجلاد ، مما يزيد من شق البروتينات الخلوية ويؤدي إلى موت الخلايا العصبية موت الخلايا المبرمجة.

استبدل الوسائط بوسائط جديدة خالية من بيروكسيد الهيدروجين لإيقاف سلسلة الإشارات.

لموت الخلايا الناجم عن ROS ، عالج الخلايا العصبية ببيروكسيد الهيدروجين عند 75 إلى 100 ميكرومولار لمدة خمس دقائق. بعد خمس دقائق ، قم بتبديلها إلى الوسائط المكيفة من الثقافات المتوازية.

نظرا لعدم استقرار بيروكسيد الهيدروجين ، يجب تحسين التركيز إلى مستوى يؤدي إلى موت الخلايا بنسبة تتراوح بين 50٪ و 70٪ بعد 24 ساعة. عادة ما يتراوح هذا التركيز بين 75 و 100 ميكرومولار.