تحديد السمية التي يسببها الجسيمات النانوية في الخلايا العصبية التي تستخدم الخلايا الدبقية الصغيرة كجهاز استشعار حيوي بديل

خذ مزارع الخلايا الدبقية الصغيرة في طبق متعدد الآبار يحتوي على وسائط.

استبدل نصف الوسائط في بئر الاختبار بوسائط تحتوي على جزيئات نانوية من الفضة ، وفي بئر التحكم بوسائط السيارة. حضن.

تستوعب الخلايا الدبقية الصغيرة الجسيمات النانوية ، وتنشط ، وتطلق السيتوكينات المؤيدة للالتهابات.

انقل وسائط السيارة والوسائط المكيفة التي تحتوي على هذه السيتوكينات إلى مرشحات مثبتة على أنابيب التجميع.

جهاز طرد مركزي لإزالة الجسيمات النانوية ، والاحتفاظ بالسيتوكينات.

اقلب المرشحات إلى أنابيب تجميع جديدة ، وأجهزة طرد مركزي ، واجمع الوسائط. أضف وسائط جديدة.

بعد ذلك ، خذ الثقافات العصبية تحت المهاد.

استبدل نصف وسائط بئر التحكم بوسائط السيارة ووسائط بئر الاختبار بوسائط مكيفة. حضن.

ترتبط السيتوكينات بالمستقبلات الموجودة على الخلايا العصبية تحت المهاد ، مما ينشط مسارات الإشارات التي تحفز موت الخلايا العصبية.

أضف ريزازورين واحتضن.

في الخلايا الحية ، تقلل إنزيمات نازعة الهيدروجين من الريزازورين الفلوري الضعيف إلى ريسوروفين الفلورسنت.

قياس التألق.

يشير انخفاض التألق إلى زيادة موت الخلايا العصبية تحت المهاد ، مما يشير إلى السمية العصبية الناجمة عن الجسيمات النانوية.

للبدء ، اجمع 200 ميكرولتر من الوسط الطافي من كل لوح جيدا ، وقم بتحميله على مرشح يزيل الجسيمات النانوية ، الموضوعة فوق أنبوب الطرد المركزي الدقيق.

من