توليد التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في نموذج الفأر

حقن الببتيدات المشتقة من المايلين بمادة مساعدة بالقرب من الغدد الليمفاوية الطرفية للفأر المخدر.

تعمل المترافقات الببتيدية المساعدة على تنشيط الخلايا العارضة للمستضد ، أو APCs ، التي تتعرف على الببتيدات وتعالجها.

ثم تهاجر APCs إلى الغدد الليمفاوية وتنشط الخلايا التائية ذاتية التفاعل.

حقن سم

السعال الديكي بشكل دوري داخل الصفاق ، مما يعطل الوصلات الضيقة بين الخلايا البطانية ويزيد من نفاذية الحاجز الدموي الدماغي.

تدور الخلايا التائية ذاتية التفاعل في الدم وتعبر الحاجز الدموي الدماغي لدخول أنسجة المخ.

تتعرف هذه الخلايا على الببتيدات الموجودة على غمد المايلين وتطلق السيتوكينات.

تقوم هذه السيتوكينات بتجنيد البلاعم والخلايا البائية في الموقع.

تطلق البلاعم أنواع الأكسجين التفاعلية التي تلحق الضرر بالخلايا قليلة التغصن المنتجة للمايلين ، بينما تتفاعل الخلايا البائية مع الخلايا التائية ، وتنشط ، وتنتج أجساما مضادة ذاتية تستهدف غمد المايلين.

هذا يؤدي إلى إزالة الميالين ، مما يضعف انتقال الأعصاب.

ارفع ذيل الفأر ؛ يشير الانخفاض التدريجي إلى تلف الأعصاب ، مما يشير إلى ظهور التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي ، أو EAE.

ابدأ هذا الإجراء بتخدير الفئران C57BL / 6 التي تم إيواؤها في ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض كما هو موضح في بروتوكول النص. قم بتثبيت الفأر المخدر بيد واحدة وحقن 30 ميكرولترا من ببتيد MOG في مستحلب مساعد فلوري كامل تحت الجلد في كل من جوانب الساق الخلفية على مقربة من الغدد الليمفاوية الأربية.

الآن ، ضع الفأر على بطنه وقم بحقن 20 ميكرولترا من مستحلب الببتيد MOG في الأنسجة الدهنية الرخوة على كل من اليسار واليمين عند جذر الذيل. أيضا ، قم بحقن قطرة صغيرة من المستحلب في عنق الفأر. حقن 100 ميكرولتر من محلول سم السعال الديكي داخل الصفاق في الفأر. أمسك رأس الفأر أسفل مركز الجسم لتجنب الحقن في الأمعاء.

استبدل نظام الصيانة الغذائي بنظام التربية الغذائي من أجل تزويد الفئران بالطعام الذي يحتوي على نسبة عالية من الطاقة قبل تحمل المرض السريري المتوقع. كرر حقن سم السعال الديكي بعد 48 ساعة من العلاج الأول.

تحقق من الحالة الصحية لفئران EAE كل صباح من خلال إلقاء نظرة داخل الأقفاص. سجل فئران EAE بعد ظهر كل يوم. أخرج كل فأر فردي مدرج في تجربة EAE من القفص ، وتحقق مما إذا كان الذيل يحتوي على نغمة.

حرك الذيل لأعلى بإصبع. الفأر السليم سوف يحافظ على ذيله. إذا بدأ EAE السريري ، فسيكون تونس الذيل أقل وضوحا من خلال الانخفاض التدريجي للذيل. في النهاية ، لن يتمكن الفأر من رفع ذيله على الإطلاق.