JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:46 د • July 8th, 2025
خذ عمليات الاستئصال بالتبريد للأنسجة القحفية الوجهية الجنينية الثابتة للفأر التي تتكون من خلايا القمة العصبية.
اغسل الأقسام في مخزن مؤقت يحتوي على منظف غير أيوني لإزالة وسط التضمين واختراق الأغشية ، مما يسمح بالوصول إلى الأهداف داخل الخلايا.
أضف حل حجب لتشبع مواقع الربط غير المحددة.
قم بإزالة محلول الحجب الزائد. بعد ذلك ، احتضن بالأجسام المضادة الأولية التي تستهدف المستضدات النووية ، مثل عوامل النسخ وعلامات الانتشار.
يغسل بمحلول عازل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
احتضان الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور للارتباط بالأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالمستضد.
قم بإزالة الأجسام المضادة غير المنضمة باستخدام المخزن المؤقت.
أضف وسيطا مضادا للبهتان بصبغة نووية فلورية وقم بتغطيتها بغطاء غطاء.
تلطخ الصبغة النوى ، ويحمي الوسط المضاد للبهتان إشارات الفلورسنت أثناء التصوير.
قم بتصوير الأقسام تحت المجهر الفلوري لتقييم تعبير العلامة النووية وتوطينها ، مما يشير إلى تكاثر خلايا القمة العصبية ونشاط الإشارات.
اشطف الشرائح في 0.1٪ PBST ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منها ، لغسل OCT واختراق الأقسام. أضف 200 ميكرولتر من محلول المنع إلى كل شريحة واحتضنه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. ثم قم بإزالة محلول الحظر دون شطف الشريحة. أضف 100 ميكرولتر من الجسم المضاد الأولي المخفف في محلول مانع لكل شريحة ، واحتضنه طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
اشطف الشرائح باستخدام PBS ثلاث مرات لمدة 10 دقائق لكل منها في درجة حرارة الغرفة. أضف 100 ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي المخفف في محلول مانع ، واحتضنه لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة ، محميا من الضوء. اشطفها في PBS ثلاث مرات لمدة 10 دقائق لكل منها في درجة حرارة الغرفة ، مع الحفاظ على الحماية من الضوء. لتركيب الشرائح، أضف قطرتين من الوسيط المضاد للبهتان باستخدام DAPI في كل شريحة. قم بتغطيتها بغطاء وتخزينها على حرارة 4 درجات مئوية حتى تصبح جاهزة للتصوير.
تصف هذه المقالة بروتوكولاً لتصوير خلايا العرف العصبي في الأنسجة القحفية الوجهية للجنين في الفأر. وتتضمن هذه الطريقة التقطيع بالتجميد، والصبغ بالأجسام المضادة، والمجهر الفلوري لتقييم تعبير المؤشرات النووية.
يتيح الصبغ المناعي للأنسجة القحفية الوجهية للفئران التصوير الدقيق للمؤشرات النووية في خلايا العرف العصبي، مما يدعم التحقق من الأهداف في المراحل المبكرة من أبحاث النمو والتجدد. كما توفر الصور الكمية للتكاثر ونشاط الإشارات معلومات تساهم في تقليل المخاطر الميكانيكية وتعزز الثقة التنبؤية لبرامج مرحلة الاكتشاف التي تركز على البيولوجيا القحفية الوجهية والهيكلية. ويدعم سير العمل هذا التطوير القوي للمقايسات والاستمرارية الانتقالية لأنظمة النماذج قبل السريرية.
يُدمج بروتوكول الصبغ المناعي هذا ضمن التسلسل الممتد من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة قبل السريرية، مما يوفر بيانات أساسية للتحقق من صحة الأهداف، وتطوير المقاييس، والأبحاث الترجمية في بيولوجيا القحف الوجهي والهيكل العظمي.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 22 أغسطس 2026