تصور حركة الحويصلة في الخلايا العصبية باستخدام التصوير الفلوري

خذ البلازميد المطلوب في وسائط خالية من المصل. يقوم هذا البلازميد بتشفير البروتينات الخاصة بالحويصلة بعلامات الفلورسنت.

في أنبوب آخر ، خذ كاشف النفقة المخفف في وسائط خالية من المصل.

امزج الحلين واحتضن.

يتحد كاشف التعدي مع البلازميد ، ويشكل مركبا.

خذ بئر يحتوي على الخلايا العصبية الملتصقة في وسائل الإعلام باستخدام المصل. أضف المجمعات واحتضنها. يسهل المركب دخول البلازميد إلى الخلية.

تجاهل الوسائط لإزالة المجمعات غير الداخلية.

أضف وسائط جديدة ثم احتضنها.

يدخل البلازميد إلى النواة المراد نسخها ثم يترجم إلى بروتينات فلورية خاصة بالحويصلة تصنف الحويصلات في الخلايا العصبية.

باستخدام مجهر مضان تحت درجة حرارة خاضعة للرقابة ، احصل على صور على فترات زمنية محددة.

لتحليل الصور، حدد معلمات التتبع.

حدد الحويصلة محل الاهتمام وسجل إحداثياتها في كل صورة.

قم بتجميع البيانات لتصور حركة الحويصلة.

في هذا الإجراء ، امزج 4 ميكروغرامات من البلازميد مع 200 ميكرولتر من الوسط الخالي من المصل. في أنبوب منفصل ، قم بتخفيف ثمانية ميكرولترات من كاشف النفقة في 200 ميكرولتر من الوسط الخالي من المصل. ثم احتضن المحلول لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد خمس دقائق ، اخلطي محلول البلازميد ومحلول كاشف الإرسال ، واحتضن الخليط لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، أضيفي الخليط إلى أطباق القاع الزجاجي المطلي.

احتض