موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:29 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بطبق استزراع يحتوي على أجنة الزرد المخصبة في وسط الجنين.
ضع الطبق تحت مجهر استريو واستخدم ملقط التشريح لإزالة المشيمة ، الغشاء الخارجي المحيط بالأجنة.
هذا يمكن الأجنة من التعرض للوسط المحيط.
انقل هذه الأجنة المتكللة إلى طبق يحتوي على وسط جنين مع دواء يثبط تخليق الكوليسترول ، وهو أمر بالغ الأهمية للحفاظ على سلامة الأوعية الدموية في الدماغ.
احتضان عند درجة حرارة مضبوطة حتى تتطور الأجنة إلى يرقات.
بمرور الوقت ، يتخلل الدواء اليرقات النامية ، مما يثبط تخليق الكوليسترول.
يؤدينقص الكوليسترول إلى إضعاف الأوعية الدموية في الدماغ ، مما يؤدي إلى تمزقها وتسرب الدم إلى الدماغ ، مما يؤدي إلى ظهور بقع نزفية.
راقب اليرقات تحت مجهر مجسم.
افصل اليرقات النزفية ، ذات البقع الحمراء المميزة ، عن السكان غير النزفيين.
انقل هذه اليرقات النزفية إلى طبق جديد لمزيد من الدراسات.
بعد 24 ساعة من الإخصاب ، تحت المجهر المجسم الساطع ، استخدم ملقط تشريح حاد فائق النحافة لإزالة الأجنة المشيمية لعلاج أتورفاستاتين. بعد ذلك ، أضف 30 مل من وسط الجنين E3 إلى طبقين نظيفين من بتري ، أحدهما للعلاج والآخر للتحكم. قم بإزالة 60 ميكرولترا من ماء الجنين من طبق المعالجة ، وأضف 60 ميكرولترا من 0.5 ملليمولار أتورفاستاتين لتحقيق نزيف 80٪ من اليرقات.
باستخدام ماصة باستور ، انقل 100 جنين في أقل قدر ممكن من الماء إلى كل طبق. احتضن الطبقين عند 28 درجة مئوية. في أي وقت بعد 50 ساعة من الإخصاب ، تحت المجهر ، استخدم ماصة باستور لفصل الأسماك النازفة بعناية عن المجموعات غير النازفة ونقل اليرقات إلى أطباق جديدة تحتوي على وسائط E3 طازجة.
لتسهيل فصل اليرقات الإيجابية للنزيف ، يمكنك استخدام الأسماك الخالية من الصبغة أو الأسماك التي تعبر عن البروتين الفلوري في خلايا الدم الحمراء.