تلطيخ الفلورسنت المناعي للبروتينات السكرية في الخلايا السلفية العصبية والخلايا العصبية

خذ الخلايا الجذعية العصبية الأولية والخلايا السلفية والخلايا العصبية ، التي تحتوي على البروتينات السكرية السيالوبروتينية الموسومة بواسطة مراسل حمض السياليك.

أضف بارافورمالدهيد لإصلاح الخلايا. قم بإزالة البارافورمالدهيد الزائد باستخدام المخزن المؤقت.

احتضان بخليط تفاعل يحتوي على مجسات كيميائية قائمة على البيوتين ، وعامل اختزال ، ومحفز معدني.

ينشط العامل المختزل المحفز ، مما يسهل بيوتينيل البروتينات

السكرية.

يرفع خليط التفاعل ويغسل بمخزن مؤقت. أضف الستربتافيدين المترافق بالفلوروفور لربط البروتينات السكرية السيالوتينية.

قم بإزالة الستربتافيدين غير المرتبط واغسله بمحلول مؤقت. أضف البروتينات والمنظف غير الأيوني لمنع المواقع غير المحددة واختراق الخلايا.

قم بإزالة هذا المحلول واحتضانه بالأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتينات خلوية معينة.

قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

احتضان الأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالفلوروفور وصبغة الفلورسنت لربط الأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالبروتين وتسمية النوى.

إزالة الجزيئات غير المرتبطة. يغسل مع العازلة.

باستخدام الفحص المجهري الفلوري ، قم بتصوير الخلايا لتصور البروتينات السكرية الفلورية والبروتينات الخلوية.

أولا ، قم بإزالة الإدخالات من ألواح الزراعة المشتركة ، واستنشق وسط الثقافة من قاع الآبار. بعد ذلك ، اغسل الخلايا العصبية مرة واحدة