الكشف عن النزيف الدماغي الدقيق في نموذج الفئران

النزيف الدماغي الدقيق ، أو CMHs ، هو نزيف دماغي التهابي عصبي ناتج عن اضطراب الحاجز الدموي الدماغي ، مما يؤدي إلى تسرب خلايا الدم الحمراء ، أو كرات الدم الحمراء ، إلى أنسجة المخ.

للكشف عن CMHs ، ابدأ بأنسجة المخ الثابتة من فأر مصاب ب CMHs.

اغمر الأنسجة في السكروز للحماية بالتبريد.

باستخدام ميكروتوم التبريد ، قم بتقسيم الأنسجة وجمع قسم على شريحة زجاجية.

يغسل لإزالة المثبت المتبقي.

ضع صبغة الهيماتوكسيلين المرتبطة بكاتيون معدني يتفاعل مع الحمض النووي سالب الشحنة ، مما يؤدي إلى تلطيخ النواة باللون الأرجواني المحمر.

اتبعيه بالكحول الحمضي لإزالة الصبغة الزائدة ، ثم ضع عامل أزرق قلوي لتحييد البيئة الحمضية وتحويل الصبغة إلى شكلها الأزرق ، مما يعزز التباين.

اغسل الأنسجة بالكحول لتحسين تغلغل البقعة ، ثم ضع اليوزين لتلطيخ كرات الدم الحمراء والبرتقالية ومكونات الأنسجة باللون الوردي.

قم بتجفيف الأنسجة باستخدام زيادة تركيزات الكحول وقم بتنظيفها بالزيلين للتصور المجهري.

التقط صورا للكشف عن كرات الدم الحمراء المسربة ذات اللون الأحمر البرتقالي ، مما يؤكد CMHs.

بعد عزل الدماغ ، اغمره في 20٪ سكروز في PBS لمدة ست ساعات على الأقل أو حتى يغرق الدماغ في قاع الأنبوب. قم بتغيير المحلول إلى 30٪ سكروز ، وقم بإصلاحه لمدة ست ساعات أخرى.

أخيرا ، قم بإعداد أقسام أنسجة المخ بسمك 10 ملم باستخدام ناظم البرد. ابدأ تلطيخ H& E عن طريق غسل الشرائح بالماء المقطر. ثم اغمر في محلول الهيماتوكسيلين لمدة ثماني دقائق. بعد التلوين ، اغسلها بماء الصنبور الجاري لمدة خمس دقائق. تفريق في 1٪ كحول حمضي لمدة 30 ثانية.

بعد الغسيل في ماء الصنبور الجاري لمدة دقيقة واحدة ، قم بتلطيخ ماء الأمونيا بنسبة 0.2٪ أو محلول كربونات الليثيوم المشبع لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة. بعد ذلك ، اغسل بماء الصنبور الجاري لمدة خمس دقائق. مضاد البقع بمحلول اليوزين لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة. يجفف من خلال 90٪ كحول ، ثم 95٪ كحول ، والكحول المطلق لمدة 0.5 إلى 2 دقيقة لكل منهما.

بعد الجفاف ، قم بإزالته في الزيلين لمدة 30 ثانية. بعد التركيب ، قم بتحليل تلطيخ H & E باستخدام مجهر مضان المجال الساطع. تظهر خلايا الدم الحمراء المنبعثة من الأوعية الدموية ، وهي مكونات CMHs ، باللون الأحمر البرتقالي تحت تلطيخ H & E.