موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:53 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بغطاء يحتوي على خلايا عصبية مستنبتة تعبر عن بروتينات غشاء الحويصلة المشبكية ، بما في ذلك synaptophysin الموسوم بالفلورسنت و synaptotagmin-1.
قم بإزالة الوسط ، وأضف مزيجا من المخزن المؤقت لإزالة الاستقطاب والأجسام المضادة الأولية ، ثم احتضانه.
تدخل الأيونات العازلة إلى الخلايا ، مما يحفز اندماج الحويصلات المشبكية مع الغشاء ، مما يكشف عن synaptotagmin-1.
ترتبط الأجسام المضادة الأولية بشكل انتقائي ب synaptotagmin-1 المكشوف.
تخلص من المخزن المؤقت واغسله بالوسيط لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
أدخل وسيطا جديدا واحتضانه لتسهيل استيعاب الغشاء ، وتشكيل حويصلات معاد تدويرها مع synaptophysin المسمى و synaptotagmin-1 المرتبط بالأجسام المضادة.
قم بإزالة الوسط ، وإصلاح الخلايا ، وغسلها.
أدخل حاجزا حاجب قائم على المنظفات مع أجسام مضادة ثانوية مقترنة بالفلوروفور.
يتخلل المنظف الخلايا ، مما يسمح للأجسام المضادة الثانوية بالتفاعل مع synaptotagmin-1 المرتبط بالأجسام المضادة.
ارفع الغطاء واغسله بالماء وجففه.
ضع الغطاء مقلوب ووجهه لأسفل على شريحة مع وسيط تضمين للتحليل البصري للحويصلات المعاد تدويرها ذات الملصقات المزدوجة.
قم بتسخين 600 ميكرولتر من 1x عازلة إزالة الاستقطاب و 10 مل من وسط زراعة الخلايا إلى 37 درجة مئوية في الحمام المائي. أضف 1 ميكرولتر من الجسم المضاد للفأر المضاد ل SYT1 إلى ا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية