التلوين المناعي للخلايا العصبية المعالجة بمجاميع ألفا سينوكلين

ابدأ بثقافة الخلايا العصبية الملتصقة المعالجة بمجاميع ألفا سينوكلين أو ألفا إس ، وهي كتل من بروتين غير مطوي.

تتجمع هذه الكتل لتشكل شوائب داخل الخلايا.

استبدل الوسائط بمحلول تثبيت للحفاظ على سلامة الخلوية.

قم بإزالة محلول التثبيت واغسله بمخزن مؤقت.

بعد ذلك ، أضف خافض للتوتر السطحي لاختراق الغشاء الخلوي.

قم بإزالة الفاعل بالسطح واغسله بمحلول عازل.

أدخل محلول مانع لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

الآن ، احتضن بالأجسام المضادة الأولية التي ترتبط على وجه التحديد بشوائب alpha-S والبروتينات الهيكلية.

يغسل بمحلول عازل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

احتضان بالأجسام المضادة الثانوية المسماة بالفلورسنت.

إزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

أضف بقعة فلورية لتسمية النواة.

قم بإزالة البقعة واغسلها بالعازلة.

باستخدام وسائط التثبيت ، قم بتركيب الغطاء مع الخلايا العصبية على شريحة.

تحت المجهر الفلوري ، لاحظ شوائب alpha-S ذات العلامات المناعية داخل الخلايا العصبية.

لإجراء التألق المناعي في غطاء الدخان الكيميائي ، قم بإصلاح الخلايا العصبية بنسبة 2٪ بارافورمالدهيد في PBS ومحلول سكروز 5٪ لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة دون اهتزاز. بعد 15 دقيقة ، قم بإزالة محلول التثبيت ، واغسل الخلايا العصبية لفترة وجيزة باستخدام PBS ثلاث مرات.

بعد ذلك ، قم باختراق الخلايا العصبية بنسبة 0.3٪ من الفاعل بالسطح غير الأيوني في PBS لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم اغسل الخلايا العصبية لفترة وجيزة باستخدام PBS ثلاث مرات. احتضان الخلايا العصبية بنسبة 3٪ FBS في PBS لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة على شاكر مداري لمنع مواقع الربط غير المحددة. بعد ذلك ، احتضان الخلايا العصبية بجسم مضاد أولي مناسب مذاب في FBS 3٪ في PBS بين عشية وضحاها في الغرفة الباردة أو الثلاجة طوال الليل عند 4 درجات مئوية على شاكر مداري.

في اليوم التالي ، قم بإزالة محلول الجسم المضاد وغسل الخلايا لفترة وجيزة باستخدام PBS لمدة ثلاث مرات. بعد ذلك ، احتضان الخلايا العصبية بالجسم المضاد الثانوي الفلوري المناسب المذاب في 3٪ FBS في PBS لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام على شاكر مداري.

قم بإزالة محلول الأجسام المضادة واغسله لفترة وجيزة باستخدام PBS لمدة ثلاث مرات. بعد ذلك ، قم بتلطيخ الخلايا العصبية بمحلول DAPI لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام على شاكر مداري. بعد 15 دقيقة ، قم بإزالة محلول الجسم المضاد واغسله لفترة وجيزة باستخدام PBS لمدة ثلاث مرات. قم بتركيب أغطية الغطاء على الشريحة باستخدام وسيط تركيب مضاد للبهتان.