نموذج في المختبر لإصابة التمدد في الخلايا العصبية المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان

ابدأ بلوحة متعددة الآبار بلا قاع متصلة بغشاء سيليكون. الغشاء مغطى ببوليمر حيوي لتسهيل التصاق الخلية.

إدخال الخلايا العصبية المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان ، أو hiPSCNs ، معلقة في وسط في الآبار. يتم استكمال الوسط بمصفوفة خارج الخلية ، أو بروتينات ECM لتعزيز التصاق الخلية.

احتضان اللوحة ، مما يسمح للخلايا بالالتصاق ببروتينات ECM والبوليمر الحيوي ، مما يعزز التفاعل المنتظم مع سطح الغشاء.

بعد ذلك ، قم بتأمين اللوحة على مسرح جهاز الإصابة.

باستخدام الجهاز ، قم بتطبيق المسافة البادئة على الغشاء لتوليد ضغط ميكانيكي متحكم فيه على الخلايا العصبية.

يعطل الإجهاد الهيكل الخلوي ، مما يؤدي إلى تنكس النتوءات الخلوية التي تسمى الأعصاب وتشكيل انتفاخات صغيرة على طول الأعصاب.

يؤدي

الإجهاد أيضا إلى إتلاف سلامة غشاء الخلية ، مما يؤدي إلى موت الخلايا.

إن hiPSCNs التي تظهر نمطا ظاهريا لإصابة التمدد جاهزة الآن للتحليل.

لتمديد اللوحة ، قم بتغيير حقل "اسم الملف" و "مسار الملف" في الأداة الافتراضية "تتبع الموضع" إلى اسم ملف فريد وانقر فوق سهم التشغيل. قم بتعيين عمق المسافة البادئة ومدتها في حقلي "الإصابة" و "مدة الإصابة" في الأداة الافتراضية للوحة التحكم في الحركة. مع وضع اللوحة في وضع الصفر ، قم بتشغيل الأداة الافتراضية "لوحة التحكم في الحركة" ، وانقر فوق جرح لوضع مسافة بادئة للوحة.

انقر فوق أعلى لتحريك المرحلة لأعلى، وانقر فوق إيقاف عندما تكون اللوحة في الموضع العلوي، وافتح الباب لإلغاء تنشيط جهاز الإصابة. بعد ذلك ، افحص سجل الإزاحة للمرحلة المعروضة في الأداة الافتراضية "Position Tracker" للتأكد من تطبيق الحد الأقصى المحدد للإزاحة ، وتصدير البيانات إلى برنامج جداول بيانات مناسب.

لتقييم امتداد غشاء السيليكون بعد المعالجة بالبلازما ، ضع اللوحة على سطح ناعم وقم بتجهيز النتوء الصغير على ختم بحبر من قلم تحديد دائم. أدخل الختم في البئر الأول المراد اختباره ، واضغط لضمان نقل الحبر بشكل جيد. عندما يتم ختم جميع الآبار ، ضع كاميرا عالية السرعة على حامل ذراع الرافعة فوق جهاز الإصابة ، مع ضبط العدسة على أصغر نقطة F مرقمة بحيث يحتوي مجال الرؤية على 12 نقطة بادئة في شبكة 3 × 4.

مع وضع اللوحة في وضع نقطة الصفر ، انقر مرة واحدة على زر التسجيل في برنامج الكاميرا بحيث يقرأ "Trigger In" وقم بتشغيل الضوء المحوري الساطع والمنتشر ، ثم قم بوضع مسافة بادئة للوحة كما هو موضح للتو ، وقم بإيقاف تشغيل الضوء المحوري.

لإصابة مزرعة الخلية ، أضف 100 ميكرولتر من الخلايا العصبية المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة بالإنسان المعالجة باللون اللامينين إلى كل بئر من الصفيحة المعالجة بالبلازما ، واترك الخلايا بالالتصاق بقاع اللوحة لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، قبل وضع اللوحة في حاضنة زراعة الخلايا. بعد 2 إلى 3 أيام من الثقافة ، قم بتثبيت اللوحة على مرحلة جهاز الإصابة واضبط موضع الغطاء لتأمين اللوحة دون تعريض الثقافات للهواء المحيط. بعد ذلك ، مع وضع اللوحة في موضع نقطة الصفر ، ضع مسافة بادئة للوحة كما هو موضح للتو.