موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:01 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بغرفة تسجيل تحتوي على شريحة دماغية سميكة مؤمنة مغمورة في السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي أو aCSF.
تشتمل شريحة الدماغ هذه على سائل خلالي ومصفوفة خارج الخلية ، وتشكل الفضاء خارج الخلية المترابط الذي يحيط بخلايا الدماغ.
اغمر القطب الصغير الانتقائي للأيونات ثنائي القناة والقطب الصغير للرحلان الأيوني في aCSF.
يتميز القطب الصغير الانتقائي للأيونات ثنائي القناة بقناة استشعار لأيونات رباعي ميثيل الأمونيوم أو TMA وقناة مرجعية ، بينما يحتوي القطب الصغير للرحلان الأيوني على محلول TMA.
يطلققطب الرحلان الأيوني أيونات TMA ، والتي تنتشر باتجاه القطب الصغير الانتقائي للأيونات.
تكتشف قناة الاستشعار أيونات TMA هذه وتولد إشارة كهربائية. سجل هذا كخط أساس.
أدخل كلا القطبين في شريحة الدماغ، مع إبقاهما متباعدين قليلا.
عندما تنتشر أيونات TMA عبر الفضاء خارج الخلية ، فإنها تصل إلى القطب الصغير الانتقائي للأيونات.
أعد تسجيل الإشارة ومقارنتها بالخط الأساسي لتحليل خصائص الفضاء خارج الخلية ، مثل كسر الحجم ودرجة الالتواء.
ضع شريحة دماغ بسمك 400 ميكرومتر في غرفة التسجيل ، مع التأكد من غمرها بالكامل في ACSF المتدفق. بعد ذلك ، حرك كل من القطب الكهربائي الأيوني الصغير و ISM فوق مجال الاهتمام على شريحة الدماغ. اغمر كلا القطبين في ACSF المتدفق ولكن فوق الشريحة. بعد ذلك ، قم بإزاحة الجهد لكل من قنوات الاستشعار المرجعية وقنوات الاستشعار الأيونية إلى 0 مللي فولت. انتظر حتى يستقر الجهد في كلتا القناتين.
على مسجل الرسم البياني ، ضع علامة على الجهد المقاس على قناة الاستشعار الأيوني ل ISM. بعد ذلك ، ضع الأقطاب الكهربائية الدقيقة ISM و iontophoresis بعمق 200 ميكرومتر في الشريحة و 120 ميكرومتر من بعضها البعض. احسب فرق الجهد بين إشارات TMA المقاسة في ACSF المتدفق وفي الدماغ وأدخل هذه القيمة في مجال فولت الملي فولت الأساسي في صندوق قطب القياس الخاص بواجهة المستخدم الرسومية (GUI) الخاصة ب Wanda.
على الجانب الأيسر من واجهة المستخدم الرسومية، تأكد من إدخال جميع المعلمات التجريبية بشكل صحيح. ابدأ التسجيل بالنقر فوق اكتساب، واسمح له بتسجيل كامل. بعد نقل كلا القطبين الدقيقين خارج الشريحة ، استخدم مسجل الرسم البياني لتحديد أي تغيير بين الجهد المقاس الآن وقياسه من قبل.