قياس مستويات حمض الريتينويك في المجالات العصبية باستخدام خط خلية مراسل حمض الريتينويك

خذ مزرعة ملتصقة لخلايا مراسل حمض الريتينويك (RA).

تحمل هذه الخلايا بنية معدلة وراثيا تحتوي على جين lacZ ، الذي يشفر β-galactosidase ، الذي ينظمه عنصر استجابة حمض الريتينويك (RARE).

الخلايا المنفصلة للبذور المشتقة من الخلايا الجذعية للحبل الشوكي للفأر. حضن.

تطلق خلايا الغلاف العصبي التهاب المفاصل الروماتويدي ، الذي يدخل خلايا المراسل ويرتبط بمركب مستقبلاته على RARE.

يؤدي هذا إلى تكوين معقد منشط النسخ ، مما يؤدي إلى تعبير β-galactosidase.

استبدل الوسائط بمثبت للحفاظ على التشكل الخلوي.

قم بإزالة المثبت واغسله بمخزن مؤقت.

أضف مخزن مؤقت للنفاذية لاختراق الأغشية الخلوية.

أدخل ركيزة β-galactosidase واحتضنها.

تدخل الركيزة إلى خلايا المراسل ، حيث يقوم β-galactosidase بتحللها إلى منتج غير مستقر يتأكسد ويتضاءل ، مكونا راسب أزرق اللون.

يغسل بمخزن مؤقت.

باستخدام قارئ صفيحة دقيقة ، قم بقياس الامتصاص ومقارنته بمنحنى قياسي لتحديد إفراز التهاب المفاصل الروماتويدي من خلايا الغلاف العصبي.

بالنسبة للثقافات المشتركة للغلاف العصبي ، ابدأ بنقل ثقافة الغلاف العصبي إلى أنابيب سعة 15 ملليلترا. قم بتدوير الأنابيب عند 200 جم لمدة 10 دقائق وقم بإزالة كل المادة الطافية باستثناء 1 مل. ثم قم بتقطيع المحتويات باستخدام ماصة P 1000.

الآن ، استخدم حجما صغيرا لتحديد كثافة الخلايا المنفصلة. بعد ذلك ، قم بوضع 100,000 خل