التسريب التجسيمي المباشر للدماغ لبروتينات أميلويد بيتا لنموذج مرض الزهايمر

ابدأ بفأر مخدر بجمجمة مكشوفة. يتم تأمين الماوس في إطار تجسيمي يحتوي على حقنة مملوءة مسبقا ببروتينات أميلويد بيتا المعرضة للتجميع.

ضع علامة على البريجما ، وهي نقطة مرجعية رئيسية لتحديد إحداثيات ضخ البروتين.

حرك المحقنة ، ولمس البريجما ، ثم لامدا ، لتحديد الإحداثيات الظهرية البطنية ، مما يضمن عمق الإبرة بدقة.

أعد وضع المحقنة فوق الإحداثي الإنسي الجانبي المحدد مسبقا ، مستهدفا التلفيف المسنن ، وهو أمر بالغ الأهمية لمعالجة الذاكرة.

المس سطح الجمجمة ، وتأكد من أن الإحداثيات الظهرية البطنية ضمن الحد الأقصى ، وقم بتمييزها. كرر هذا الإجراء على الجانب الآخر.

حفر في الإحداثيات الإنسية الجانبية ملحوظة ، وحقن بروتينات الأميلويد بيتا في التلفيف المسنن ، واضغط على منع التدفق العكسي.

حفر وحقن بروتينات أميلويد بيتا على الجانب الآخر لتشتت البروتين بشكل موحد.

افصل قضبان الأذن عن الماوس ، ثم قم بخياطة الشق.

بمرور الوقت ، تتجمع بروتينات الأميلويد بيتا لتشكيل لويحات تحلل الخلايا العصبية التلفيف المسننة وتعطل معالجة الذاكرة ، مما يؤدي إلى مرض الزهايمر.

قم بعمل شق من 2 إلى 3 ملم في خط الوسط من فروة الرأس بمشرط. استخدم مقصا مستقيما ناعما لتمديد خط الشق إلى حوالي 1.0 سم لفضح الخيط السهمي والبريجما واللامدا للجمجمة. بعد ذلك ، استخدم الملقط لفصل الجلد.

نظف الجمجمة بقطعة قطن معقمة مبللة بمحلول ملحي معقم. ثم استخدم قطعة قطن نظيفة وجافة لتجفيف الجمجمة. بعد ذلك ، ضع علامة على نقطة على البريجما. ضع حقنة هاميلتون باستخدام أداة المعالجة الدقيقة بحيث يلامس طرف الإبرة النقطة الموجودة على البريجما. ثم سجل إحداثيات DV.

ضع علامة على نقطة على نقطة لامدا. تأكد من أن محور AP للجمجمة مستوي عن طريق تحريك المحقنة للخلف إلى نقطة لامدا. يجب أن يلمس طرف الإبرة نقطة لامدا كما فعل نقطة بريجما. بعد ذلك ، سجل موضع DV. يجب أن تكون إحداثيات DV للبريغما واللامدا في حدود 0.5 ملليمتر.

الآن ، أعد طرف الإبرة إلى نقطة بريجما. سجل موضع نقطة الوصول البدء. بعد ذلك ، احسب موضع نقطة الوصول النهائية عن طريق طرح 2 ملليمتر من إحداثيات نقطة الوصول الأولية ، وأعد وضع إبرة المحقنة إلى إحداثيات نقطة الوصول النهائية.

بعد ذلك ، قم بتسجيل إحداثيات التعلم الآلي الحالية. احسب إحداثيات ML الطرفية اليمنى واليسرى عن طريق إضافة أو طرح 1.3 ملم من إحداثيات ML البدءية ، وحرك إبرة المحقنة إلى إحداثيات ML النهائية. المس طرف الإبرة على سطح الجمجمة على كل من إحداثيات ML الطرفية ، وتأكد من أن إحداثيات DV في حدود 0.5 ملليمتر.

أثناء إحداثيات ML في النهاية ، اسحب الإبرة لأعلى من 0.5 إلى 1 سم فوق الجمجمة. ضع علامة على نقطة على الجمجمة بعلامة داكنة اللون. كرر هذه الخطوة للجانب المقابل للجمجمة. ثم حرك المحقنة بعيدا.

احفر حفرة على إحداثيات ML اليسرى أو اليمنى على الجمجمة باستخدام مثقاب 0.8 ملم. كرر هذه الخطوة للجانب المقابل. بعد ذلك ، انقل المحقنة إلى أحد الثقوب التي تم إدخالها حديثا. اخفض الإبرة إلى ما بعد الجمجمة مباشرة ، واحرص على عدم ثقب الدماغ.

للتأكد من أن الإبرة قد اجتازت الجمجمة ، ادفع الإبرة برفق على الجمجمة للتأكد من أن الإبرة لا تخرج من الحفرة. بعد ذلك ، قم بتسجيل إحداثيات DV الأساسية. احسب إحداثيات DV النهائية عن طريق طرح 2.2 ملم من إحداثيات DV الأولية ، وخفض الإبرة إلى إحداثيات DV النهائية.

بعد ذلك ، اضبط مضخة الحاقن التجسيمي لضخ 4 ميكرولتر من Aβ_1-42 في التلفيف المسنن بمعدل 0.5 ميكرولتر في الدقيقة. بعد التسريب ، اترك الإبرة في مكانها لمدة دقيقة إضافية لتقليل التدفق العكسي للمحلول خارج موقع الحقن. بعد ذلك ، انقل الإبرة إلى الجانب الآخر من الدماغ وكرر الإجراء.

الآن ، قم بفك قضبان الأذن. استخدم ملقط نمط الطالب القياسي لسحب فروة الرأس لإغلاق وإغلاق الجرح بخياطة. انزع واقي الأنف وقم بإزالة الماوس.