تلطيخ الفلورسنت المناعي للخلايا العصبية في الجهاز الهضمي الفأري الجنيني

خذ الجهاز الهضمي الجنيني المعدل وراثيا في مرحلة النمو المطلوبة.

الجهاز

العصبي المعوي الجهاز الهضمي يشمل الخلايا العصبية المعوية والخلايا العصبية اتروبين التي تعبر عن الكولين أسيتيل ترانسفيراز.

هذه الخلايا العصبية اتروبين تعبر أيضا عن بروتين الفلورسنت مدفوعة بمحفز أستيل ترانسفيراز الكولين.

احتضان المسالك بمنظف غير أيوني وبروتينات لاختراق الخلايا ومنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

استبدال الأجسام المضادة الأولية. احتضان الأجسام المضادة لربط البروتينات المستهدفة في الخلايا العصبية ، على التوالي.

قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة واغسلها بمحلول عازل.

احتضان الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور لربط الأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالبروتينات المستهدفة على وجه التحديد.

قم بإزالة الأجسام المضادة الزائدة وغسلها بمحلول عازل.

اغمر المسالك المسمى في وسائط التثبيت التي تحتوي على صبغة نووية لتلطيخ النوى. الآن ، قم بتركيب غطاء.

باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر ، تصور وتحليل توزيع الخلايا العصبية الكولينية في الجهاز الهضمي.

ضع المسالك الهضمية في أنبوب سعة 0.2 مليلتر يحتوي على محلول مانع ، يتكون من 1x PBS ، و 3٪ ألبومين مصل بقري ، و 0.1 Triton X-100 ، وصخور لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد الانسداد، استنشق محلول الانسداد بماصة باستور ذات رؤوس دقيقة واستبدلها بالتخف