$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
ضع الفأر على جهاز المشي لتسجيل حركة الجري ، وتقييم وظيفته الحركية ، والتي تمثل القدرة على التحكم في حركات الجسم.
بعد الاختبار ، قم بحقن سم السعال الديكي في تجويف البطن للفأر المخدر ، لإضعاف حاجز الدم العصبي.
بعد ذلك ، قم بإزالة الشعر بين لوحي كتف الفأر ، وتطهير المنطقة ، وحقن الببتيدات التي تحاكي المايلين بمادة مساعدة في الأنسجة تحت الجلد.
كرر كلا الحقنتين للحصول على ردود فعل مثالية.
تحفز الببتيدات الخلايا العارضة للمستضد ، والتي تهاجر إلى الغدد الليمفاوية وتنتج خلايا تائية ذاتية التفاعل.
تدخل هذه الخلايا التائية إلى مجرى الدم ، وتعبر حاجز الدم العصبي الضعيف ، وتستهدف الأعصاب الطرفية ، مما يؤدي إلى إطلاق السيتوكينات.
هذا يجذب البلاعم والخلايا البائية ، التي تطلق جزيئات المستجيب التي تحلل غمد المايلين.
يؤدي انهيار المايلين إلى إضعاف نقل الإشارات العصبية وظهور التهاب العصب المناعي الذاتي التجريبي أو EAN.
أخيرا ، كرر اختبار جهاز المشي. يظهر الفأر صعوبة في الجري وتنسيق حركات الأطراف ، مما يشير إلى خلل وظيفي في الحركة.
قبل ثلاثة أيام من تحريض المرض ، قم بتشغيل جهاز تقييم الوظيفة الحركية وقم بتشغيل زر الضوء. التقط الماوس وقم بخفضه في وعاء من صبغة الطعام الحمراء. ضع الماوس في حجرة المشي واضبط سرعة جهاز المشي على 15 سم في الثانية. قم بتشغيل جهاز المشي ، وانقر فوق "تسجيل" لاستخدام نظام تصوير وظيفة المشي لالتقاط حركة تشغيل الماوس لمدة 36 ثانية.
بعد 36 ثانية ، أوقف التسجيل وجهاز المشي ، واحفظ ملف فيديو تشغيل الممارسة لتشغيل الممارسة في المجلد المخصص.
قبل يوم واحد من التحصين الأول ، استخدم حقنة 0.5 ملليلتر مزودة بإبرة قياس 301/2 لإدارة 1.6 ميكروغرام لكل مليلتر من سم السعال الديكي في 250 ميكرولتر من PBS IP متساوي التوتر للفأر ، لتخدير ذكور C57 أسود 6 فئران تتراوح أعمارهم بين ستة إلى ثمانية أسابيع.
في اليوم التالي ، امزج كميات متساوية من محاليل الببتيد المحضرة حديثا في محلول ملحي بنسبة 0.9٪ و 20 ملليغرام لكل ملليلتر من المتفطرة السلية في مساعد فرويند الكامل في مضرب حبة ، واخلط المحاليل بأقصى سرعة لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
قم بتحميل حقنة مزودة بإبرة قياس 23 باللقاح ، وقم بقلب المحقنة ورجها قبل إخلاء أي هواء داخل عمود المحقنة.
قبل إعطاء اللقاح ، قم بإزالة الشعر بشكل جانبي إلى خط الوسط بين لوح الكتف وتطهير الجلد المكشوف بنسبة 70٪ من الإيثانول.
بعد ذلك ، استخدم زوجا من ملقط أديسون للإمساك بالجلد وتوصيل 50 ميكرولترا من المحلول إلى الفأر المحقون بالسعال الديكي عن طريق الحقن تحت الجلد.
في صباح اليوم التالي ، قم بتسليم 1.2 ميكروغرام لكل مليلتر من سم السعال الديكي في 250 ميكرولتر من PBS IP ، كما هو موضح للتو ، متبوعا ب 1.2 ميكروغرام آخر لكل حقن مليلتر من سموم السعال الديكي IP بعد 48 ساعة.
بعد ثلاثة أيام ، بعد الحقن الثالث للسعال الديكي ، قم بإعطاء 50 ميكرولترا أخرى من اللقاح المحضر حديثا في نفس موقع الحقن كما كان من قبل ، وراقب النتيجة السريرية والوظيفة الحركية للحيوانات مرتين في الأسبوع حتى نهاية التجربة.