موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:18 دقيقة • July 8th, 2025
خذ دماغ فأر منفوخ في المخزن العازل.
يصاب الدماغ بالليستيريا monocytogenes المقاومة للستربتومايسين ، وهي بكتيريا مسببة للأمراض.
تزيل خطوة التروية الدم من الدماغ ، مما يضمن أن قياسات العبء البكتيري تعكس حمل الليستيريا المستعدة في الأنسجة.
بعد ذلك ، قم بتجانس الدماغ باستخدام الخالط المعقم لتكسير الأنسجة وإطلاق البكتيريا.
الآن ، قم بإعداد التخفيفات التسلسلية للدماغ المتجانس باستخدام المخزن المؤقت.
ضع هذه التخفيفات على ألواح أجار منقوع القلب في الدماغ التي تحتوي على الستربتومايسين ، وهو مضاد حيوي.
احتضان اللوحات. يوفر أجار تسريب القلب في الدماغ العناصر الغذائية لنمو الليستيريا المستعدة ، بينما يختار الستربتومايسين البكتيريا المقاومة ، مما يسمح فقط بتكوين مستعمرات الليستيريا المقاومة للستربتومايسين.
احسب عدد المستعمرات الموجودة على اللوحة لتحديد وحدات تكوين المستعمرة ، وهو مقياس للحمل البكتيري المعدي القابل للحياة في الدماغ.
باستخدام الملقط ، افتح الجمجمة لكشف الدماغ وضع ملعقة بين الجانب السفلي من الدماغ وقاعدة الجمجمة لنقل الدماغ بعناية إلى أنبوب سعة 15 مليلتر يحتوي على 5 ملليلتر من 4 درجات مئوية PBS.
في خزانة السلامة الحيوية ، أدخل الطرف وقم بتشغيل مالطس الأنسجة لمدة 10 ثوان في محلول تبييض متسلسل بنسبة 5٪ ، وماء معقم ، و 75٪ إيثانول ، ومحاليل مياه معقمة في أنابيب مخروطية منفصلة سعة 15 ملليلترا. عندما يتم تعقيم الطرف تماما ، قم بتجانس الدماغ المصاب في أنبوبه.
قم بإعداد تخفيفات تسلسلية عشرة أضعاف لكل عضو متجانس في PBS معقم وقم بلوحة التخفيفات على ألواح أجار ضخ القلب في الدماغ. بعد ذلك ، قم باحتضان مزارع التخفيف المتجانسة عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها ، واحسب عدد المستعمرات على كل صفيحة لتحديد العدد الإجمالي للبكتيريا لكل عضو أو مليلتر من الدم.