JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:18 د • July 8th, 2025
خذ دماغ فأر منفوخ في المخزن العازل.
يصاب الدماغ بالليستيريا monocytogenes المقاومة للستربتومايسين ، وهي بكتيريا مسببة للأمراض.
تزيل خطوة التروية الدم من الدماغ ، مما يضمن أن قياسات العبء البكتيري تعكس حمل الليستيريا المستعدة في الأنسجة.
بعد ذلك ، قم بتجانس الدماغ باستخدام الخالط المعقم لتكسير الأنسجة وإطلاق البكتيريا.
الآن ، قم بإعداد التخفيفات التسلسلية للدماغ المتجانس باستخدام المخزن المؤقت.
ضع هذه التخفيفات على ألواح أجار منقوع القلب في الدماغ التي تحتوي على الستربتومايسين ، وهو مضاد حيوي.
احتضان اللوحات. يوفر أجار تسريب القلب في الدماغ العناصر الغذائية لنمو الليستيريا المستعدة ، بينما يختار الستربتومايسين البكتيريا المقاومة ، مما يسمح فقط بتكوين مستعمرات الليستيريا المقاومة للستربتومايسين.
احسب عدد المستعمرات الموجودة على اللوحة لتحديد وحدات تكوين المستعمرة ، وهو مقياس للحمل البكتيري المعدي القابل للحياة في الدماغ.
باستخدام الملقط ، افتح الجمجمة لكشف الدماغ وضع ملعقة بين الجانب السفلي من الدماغ وقاعدة الجمجمة لنقل الدماغ بعناية إلى أنبوب سعة 15 مليلتر يحتوي على 5 ملليلتر من 4 درجات مئوية PBS.
في خزانة السلامة الحيوية ، أدخل الطرف وقم بتشغيل مالطس الأنسجة لمدة 10 ثوان في محلول تبييض متسلسل بنسبة 5٪ ، وماء معقم ، و 75٪ إيثانول ، ومحاليل مياه معقمة في أنابيب مخروطية منفصلة سعة 15 ملليلترا. عندما يتم تعقيم الطرف تماما ، قم بتجانس الدماغ المصاب في أنبوبه.
قم بإعداد تخفيفات تسلسلية عشرة أضعاف لكل عضو متجانس في PBS معقم وقم بلوحة التخفيفات على ألواح أجار ضخ القلب في الدماغ. بعد ذلك ، قم باحتضان مزارع التخفيف المتجانسة عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها ، واحسب عدد المستعمرات على كل صفيحة لتحديد العدد الإجمالي للبكتيريا لكل عضو أو مليلتر من الدم.
توضح هذه المقالة بروتوكولاً لقياس الحمل البكتيري المعدي لـ Listeria monocytogenes في دماغ الفأر المروى. تتضمن الطريقة معالجة دقيقة للأنسجة، والزراعة الانتقائية، وعدّ المستعمرات لتقييم العبء البكتيري في أنسجة الدماغ بدقة بعد العدوى.
إن تقدير كمية الاستعمار البكتيري في أنسجة دماغ الفأر المروية يتيح تقييماً دقيقاً لديناميكيات العدوى وعبء المسببات المرضية النوعية للأنسجة. ويدعم سير العمل هذا الحد من المخاطر الميكانيكية في نماذج الأمراض المعدية، ويوفر معلومات للتحقق من الأهداف في دراسات التفاعل بين المضيف والمسبب المرضي. ويعد القياس الدقيق للحمل البكتيري أمراً بالغ الأهمية للأبحاث الانتقالية واتخاذ القرارات المتعلقة بمحفظة البحث والتطوير في مجال مضادات العدوى.
تتكامل هذه الطريقة ضمن سلسلة اكتشاف الأمراض المعدية، بدءاً من اختبار الفرضيات المبكرة وصولاً إلى التحقق من صحة النماذج قبل السريرية والأبحاث الانتقالية.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 22 أغسطس 2026