نظرة عامة
توضح هذه المقالة بروتوكولاً لقياس الحمل البكتيري المعدي لـ Listeria monocytogenes في دماغ الفأر المروى. تتضمن الطريقة معالجة دقيقة للأنسجة، والزراعة الانتقائية، وعدّ المستعمرات لتقييم العبء البكتيري في أنسجة الدماغ بدقة بعد العدوى.
المكونات الرئيسية للدراسة
مجال العلوم
- علم الأحياء الدقيقة
- أبحاث الأمراض المعدية
- علم الأعصاب
خلفية علمية
- Listeria monocytogenes هي بكتيريا ممرضة قادرة على إصابة الدماغ.
- يعد تقدير الحمل البكتيري في أنسجة الدماغ أمراً ضرورياً لدراسة ديناميكيات العدوى والتفاعلات بين المضيف والممرض.
- تعمل عملية التروية على إزالة الدم، مما يضمن أن القياسات تعكس البكتيريا الموجودة في أنسجة الدماغ نفسها.
- يسمح الزرع الانتقائي بتحديد وتقدير السلالات البكتيرية المقاومة للمضادات الحيوية.
الغرض من الدراسة
- توفير بروتوكول قابل للتكرار لقياس عبء بكتيريا Listeria monocytogenes في أنسجة دماغ الفئران.
- ضمان القياس الكمي الدقيق عن طريق إزالة الدم واستزراع البكتيريا المقاومة بشكل انتقائي.
- تسهيل الدراسات المتعلقة بعدوى الدماغ والامراضية البكتيرية.
الطرق المستخدمة
- إجراء تروية للفئران لإزالة الدم من الدماغ.
- تشريح الدماغ ونقله إلى محلول PBS بارد.
- تجنيس أنسجة الدماغ باستخدام مجنس معقم.
- تحضير تخفيفات تسلسلية بمقدار عشرة أضعاف من متجانس الدماغ في محلول PBS معقم.
- زراعة التخفيفات على آجار تحضير القلب والدماغ (brain heart infusion agar) المحتوي على الستربتومايسين.
- تحضين الأطباق عند 37°C طوال الليل.
- عد المستعمرات البكتيرية لتحديد عدد الوحدات المكونة للمستعمرات (CFU).
النتائج الرئيسية
- العزل والتقدير الكمي الناجح لبكتيريا Listeria monocytogenes المقاومة للستريبتومايسين من أنسجة دماغ الفأر.
- القياس الدقيق للحمل البكتيري الحي بوحدات CFU لكل عضو أو لكل مليلتر من الدم.
- استعراض سير عمل موثوق لتقييم عدوى الدماغ في النماذج التجريبية.
الاستنتاجات
- يتيح البروتوكول الموصوف التحديد الكمي الدقيق لبكتيريا Listeria monocytogenes في أدمغة الفئران التي خضعت لعملية التروية.
- تعتبر عملية التروية والزراعة الانتقائية أمرين حاسمين للتقييم الدقيق للعبء البكتيري الخاص بالأنسجة.
- تدعم هذه الطريقة الأبحاث المتعلقة بالإمراض البكتيري واستجابات المضيف في الدماغ.
لماذا يُعد التروية ضرورياً قبل استخراج الدماغ؟
يعمل التروية على إزالة الدم من الدماغ، مما يضمن أن تعكس أعداد البكتيريا فقط تلك البكتيريا الموجودة في أنسجة الدماغ، وليس في الدم.
ما الغرض من استخدام بكتيريا Listeria monocytogenes المقاومة للستريبتوميسين؟
يسمح استخدام سلالة مقاومة للستريبتومايسين بالنمو الانتقائي وتقدير كمية البكتيريا على أطباق الآجار التي تحتوي على الستريبتومايسين، مما يمنع التلوث من الميكروبات الأخرى.
كيف يتم تجنيس الدماغ لتقدير كمية البكتيريا؟
يتم تجنيس الدماغ في محلول PBS بارد باستخدام مجنس أنسجة معقم لتفتيت النسيج وتحرير البكتيريا من أجل التخفيف والزراعة اللاحقين.
لماذا يتم تحضير التخفيفات المتسلسلة قبل الزراعة في الأطباق؟
تضمن التخفيفات المتسلسلة أن يكون عدد المستعمرات على أطباق الآجار قابلاً للعد وضمن نطاق موثوق لتحديد عدد الوحدات المكونة للمستعمرات (CFU) بدقة.
كيف يتم حساب الوحدات المكونة للمستعمرات (CFU)؟
بعد التحضين طوال الليل، يتم عد المستعمرات على الأطباق من التخفيفات المناسبة، ويُحسب عدد CFU لكل عضو أو لكل ملليلتر بناءً على عوامل التخفيف.
ما هي احتياطات السلامة البيولوجية الضرورية خلال هذا البروتوكول؟
يجب تنفيذ جميع خطوات التعامل مع الأنسجة وتجنيسها داخل كابينة السلامة البيولوجية، كما يجب تعقيم المعدات بين العينات لمنع التلوث الخلطي وضمان السلامة.