تقييم الاستعمار البكتيري في دماغ الفأر بعد عدوى الليستيريا المستعدة

خذ دماغ فأر منفوخ في المخزن العازل.

يصاب الدماغ بالليستيريا monocytogenes المقاومة للستربتومايسين ، وهي بكتيريا مسببة للأمراض.

تزيل خطوة التروية الدم من الدماغ ، مما يضمن أن قياسات العبء البكتيري تعكس حمل الليستيريا المستعدة في الأنسجة.

بعد ذلك ، قم بتجانس الدماغ باستخدام الخالط المعقم لتكسير الأنسجة وإطلاق البكتيريا.

الآن ، قم بإعداد التخفيفات التسلسلية للدماغ المتجانس باستخدام المخزن المؤقت.

ضع هذه التخفيفات على ألواح أجار منقوع القلب في الدماغ التي تحتوي على الستربتومايسين ، وهو مضاد حيوي.

احتضان اللوحات. يوفر أجار تسريب القلب في الدماغ العناصر الغذائية لنمو الليستيريا المستعدة ، بينما يختار الستربتومايسين البكتيريا المقاومة ، مما يسمح فقط بتكوين مستعمرات الليستيريا المقاومة للستربتومايسين.

احسب عدد المستعمرات الموجودة على اللوحة لتحديد وحدات تكوين المستعمرة ، وهو مقياس للحمل البكتيري المعدي القابل للحياة في الدماغ.

باستخدام الملقط ، افتح الجمجمة لكشف الدماغ وضع ملعقة بين الجانب السفلي من الدماغ وقاعدة الجمجمة لنقل الدماغ بعناية إلى أنبوب سعة 15 مليلتر يحتوي على 5 ملليلتر من 4 درجات مئوية PBS.

في خزانة السلامة الحيوية ، أدخل الطرف وقم بتشغيل مالطس الأنسجة لمدة 10 ثوان في محلول تبييض متسلسل بنسبة 5٪ ، وماء معقم ، و 75٪ إيثانول ، ومحاليل مياه معقمة في أنابيب مخروطية منفصلة سعة 15