الكشف عن التوطين المشترك لمستقبلات الأوريكسين والقنب في أسماك الزرد البدينة التي يسببها النظام الغذائي

في دماغ الزرد ، تعبر الخلايا العصبية عن مستقبلات الأوريكسين والقنب التي تنظم عملية التمثيل الغذائي.

في السمنة المفرطة التي يسببها النظام الغذائي ، أو DIO ، أسماك الزرد ، تشارك هذه المستقبلات بشكل متزايد في تكوين غيري الأحجار ، مما يغير الإشارات النهائية ويؤثر على تنظيم التمثيل الغذائي.

خذ عمليات الاستئصال بالتبريد لأنسجة المخ من كل من أسماك الزرد الشاهدة و DIO. اغسل الأقسام بمخزن مؤقت لإزالة وسط التضمين.

عالج باستخدام عازل مانع النفاذية لاختراق الأغشية الخلوية وإخفاء مواقع الارتباط غير المحددة. يغسل لإزالة المخزن المؤقت الزائد.

احتضن بكوكتيل الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف المستقبلات. يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

احتضان الأجسام المضادة الثانوية المختلفة المسماة بالفلوروفور والتي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية. يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

أضف صبغة ملزمة للحمض النووي الفلوري لتسمية النواة. ثم قم بتطبيق وسيط تثبيت وأغلق الأقسام بغطاء

باستخدام مجهر متحد البؤر ، اكتشف مضان الجسم المضاد. تشير زيادة التوطين المشترك للأجسام المضادة في أسماك الزرد DIO مقارنة بالضوابط إلى تغاير مستقبلات أعلى.

أولا ، اشطف الأقسام ثلاث مرات لمدة 5 دقائق لكل منها بمحلول فوسفات 0.1 مولار. أضف مزيج الأجسام المضادة الأولية إلى لوتيتيوم PBT ، واحتضن الأقسام طوال الليل في صندوق رطب في