موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 1:58 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بلوحة متعددة الآبار تحتوي على حاجز دموي دماغي في المختبر أو نموذج BBB.
يتكون هذا النموذج من خلايا بطانية ملتصقة بالجانب العلوي أو الدم والخلايا النجمية في الجانب السفلي أو الدماغ من غشاء مغلف بالمصفوفة.
أضف الفلورسينات إيزوثيوسيانات أو FITC ، وهي صبغة فلورية ، إلى الغرفة العلوية لبئر التحكم.
على العكس من ذلك ، أضف الفيريتين المحمل ب FITC ، أو FITC-ferritin ، إلى الغرفة العلوية لبئر العينة ثم احتضنها.
في بئر التحكم ، يظل FITC المجاني محصورا في الغرفة العلوية ، مع الحد الأدنى من العبور عبر BBB.
وفي الوقت نفسه ، في العينة جيدا ، ترتبط مجمعات FITC-ferritin بالمستقبلات الموجودة على الخلايا البطانية.
هذا يسمح باستيعاب المستقبلات ونقلها إلى الغرفة السفلية.
بعد ذلك ، اجمع الوسط بانتظام من الغرف السفلية لكلا الآبار وقم بقياس شدة التألق.
يظهر عنصر التحكم مضان أقل ، بينما تعرض العينة تأهلا أعلى ، مما يؤكد نفاذية BBB التفاضلية ل FITC و FITC-ferritin.
لقياس تدفق FITC-ferritin عبر نظام الحاجز الدموي الدماغي ، أضف الفيريتين المحمل ب FITC أو FITC الحر إلى الجزء العلوي من ثلاثة أنظمة حاجز دموي دماغي على الأقل لكل تركيبة.
بعد سبع ساعات في حاضنة ، اسحب 2 مل من الوسط من الغرف السفلية لثلاث عينات وإدخالات تحكم. قياس شدة التألق البالغة 500 ميكرولتر من العينات التي تم جمعها بواسطة مقياس الطيف الفلوري ، وتحديد تركيز FITC أو FITC-ferritin المتخلل وفقا للتعليمات الواردة في الجزء المكتوب من البروتوكول.