موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 1:59 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بجرو فأر معدل وراثيا يحمل جين CCM2 ، وهو أمر ضروري لاستقرار الأوعية الدموية.
يحيط بهذا الجين موقعان من loxP. تعبر الخلايا البطانية للجرو أيضا عن إنزيم Cre recombinase المدمجة في مستقبلات هرمون الاستروجين أو ER.
حقن 4-هيدروكسي تاموكسيفين أو 4-HT داخل المعدة في الجرو.
ينتشر 4-HT من خلال الخلايا البطانية ويرتبط بجزء مستقبلات هرمون الاستروجين من بروتين اندماج Cre-ER.
يؤديهذا الارتباط إلى تغيير توافقي ينشط Cre recombinase ، الذي يدخل نواة الخلايا البطانية ويرتبط بمواقع loxP.
هذا يسهل حدث إعادة التركيب بين مواقع loxP ، وتشكيل حلقة ويستأصل الجزء الجيني CCM2.
يؤدي فقدان CCM2 إلى تعطيل سلامة الخلايا البطانية ، مما يعرض استقرار جدران الأوعية الدموية للخطر.
هذا يؤدي إلى تطور هياكل الأوعية الدموية غير الطبيعية المتورمة المعروفة باسم التشوهات الكهفية الدماغية أو CCMs ، وهي هشة وعرضة للتسرب.
ابدأ بإذابة 4-HT في 100٪ إيثانول بتركيز 10 ملليغرام لكل مليلتر. قم بإعداد 30 ميكرولتر ، ثم قم بتخزينها عند 80 درجة مئوية تحت الصفر. في يوم الاستخدام ، قم بتخفيف 4-HT في زيت الذرة إلى 0.5 ملليغرام لكل مليلتر. بعد ذلك ، استخدم حقنة الأنسولين لحقن 50 ميكرولترا من 4-HT داخل المعدة في صغار الأطفال حديثي الولادة P1 للحث على آفات CCM التجريبية.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية