دراسة تراكم ألفا سينوكلين في الخلايا العصبية الدوبامين الجنينية الأولية للفأر

JoVE Encyclopedia of Experiments

علم الأعصاب

0 مشاهدات • 3:13 د • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خذ مزارع الجزر الصغيرة للخلايا العصبية الدوبامين الأولية للفأر الجنيني في صفيحة متعددة الآبار تحتوي على وسائط.

تتم معالجة هذه الخلايا العصبية مسبقا بألياف مسبقة التكوين (PFFs) - وهي أشكال غير مطوية ومجمعة من بروتين ألفا سينوكلين.

تعمل PFFs كبذور ، مما يؤدي إلى مزيد من الخلل في الطي وقلة ألفا سينوكلين الداخلي ، وتشكيل ألياف ألفا سينوكلين الفسفرية. تشكل هذه الألياف في النهاية أجسام ليوي.

استبدل الوسائط بمثبت للحفاظ على التشكل الخلوي.

اغسل الخلايا بالعازلة.

أدخل عازلة تحتوي على منظف لاختراق أغشية الخلايا.

أضف محلول حجب لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحدد.

أضف الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف ألفا سينوكلين الفسفوري وبروتين مرجعي يتم التعبير عنه في كل مكان في الخلايا العصبية الدوبامينية.

يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

إدخال الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية المعنية.

يغسل مرة أخرى لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

أضف صبغة ملزمة للحمض النووي لتلطيخ النوى.

باستخدام ماسح ضوئي للوحة مضان ، حدد كمية الخلايا العصبية الدوبامين التي تحتوي على مجاميع ألفا سينوكلين السيتوبلازمية.

أضف 3.75 ميكرولتر من 100 ميكروغرام لكل مليلتر من الألياف المشكلة مسبقا إلى كل بئر تجريبي ، و 3.75 ميكرولتر من PBS لكل بئر تحكم.

عند العمل مع PFFs ، كن حذرا بشأن تلوث البروتين غير المرغوب فيه وبعد ذلك ، قم بتنظيف الغطاء وجميع الأدوات المرتبطة ب PFF باستخدام 1٪ SDS و 70٪ إيثانول.

عند نقطة النهاية التجريبية المناسبة ، بعد تلطيخ علامات الاهتمام ، قم بتحميل لوحة ثقافة البئر 96 على ماسح ضوئي للوحة عالية المحتوى ، مزود بهدف 10x. اضبط الإعدادات وفقا لمواصفات لوحة البئر 96 ، مثل نوع اللوحة والشركة المصنعة والحجم والمسافة بين الآبار ونوع وحجم الوسط.

حدد منطقة التصوير للآبار لتغطية جميع الخلايا في كل جزيرة صغيرة ، واستخدم بئرا واحدا لضبط التركيز البؤري التلقائي على تعبير DAPI. قم بمعايرة وقت الاستحواذ لكل قناة فلورية ، بناء على شدة التلوين في آبار التحكم ، واضبط المعلمات بحيث يتم تمييز خلايا الدوبامين في آبار التحكم المعالجة بالألياف مسبقة التشكيل ، والتي تحتوي على مجاميع الفوسفوسرين 129 ألفا سينوكلين داخل سوما الخلية ، مما يسمح بقياس كمي لا لبس فيه للخلايا الإيجابية والسالبة للفوسفوسيرين ألفا سينوكلين.

بعد ذلك ، قم بتصوير جميع الآبار المحددة في وقت واحد في جميع القنوات ، باستخدام نفس المعلمات تماما لكل بئر.

12:01

الكشف عن الأمراض المرتبطة α-synuclein التي كتبها المحسن ELISA في دماغ الفئران المعدلة وراثيا Overexpressing A53T الإنسان تحور α-synuclein

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:32

التصوير تلألؤ بيولوجي من Neuroinflammation في الفئران المعدلة وراثيا بعد الطرفية تلقيح ألفا Synuclein الألياف

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:33

استهداف المجاميع ألفا سينوكلين في ألياف الأعصاب الطرفية الجلدية عن طريق اختبار المناعة العائمة الحرة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:42

تطبيق الفحص جيم ايليجانس الدوبامين العصبية للتحلل من التحقق من صحة جينات مرض باركنسون المحتملة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

01:37

تقييم التأثيرات العصبية لمركب الاختبار ضد سمية ألفا سينوكلين في الخلايا العصبية الجنينية للفئران

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:04

عزل وثقافة الخلايا العصبية الدوبامين في منتصف الدماغ الجنيني الأولي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:17

تقييم الظواهر الاعصاب في

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:58

الثقافة الابتدائية من الخلايا العصبية الدوبامين ماوس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:33

تطوير وبناء الجرذ نموذج ألفا synuclein لمرض باركنسون عن طريق حقن المجسم من النواقل الفيروسية المؤتلف المرتبطة الغدة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:16

إدارة خارجية من المجاميع المرتبطة ميكروسوميس ألفا-سينوكلين إلى الخلايا العصبية الأولية كنموذج خلية قوية لتشكيل ييفات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 15 أغسطس 2026